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1、長期施肥對土壤微生物量碳的影響研究宋健土壤微生物量是植物營養(yǎng)物質(zhì)的源和庫，并積極參加養(yǎng)分循環(huán)，代表土壤養(yǎng)分的活性部分，因此常被用于評價土壤質(zhì)量的生物學(xué)性狀。土壤呼吸和微生物代謝商綜合了微生物量的大小和活性，可以較好地反映土壤環(huán)境質(zhì)量的變化?；镜耐寥蕾|(zhì)量或健康生物指標(biāo)應(yīng)當(dāng)包括微生物碳、氮，潛在礦化氮，土壤呼吸，微生物商等。微生物量，土壤呼吸及其衍生指數(shù)，一些土壤功能微生物、土壤酶等均可看做目前具有潛力的生物學(xué)指標(biāo)。許多研究表明，土壤微生物量、土壤呼吸及其衍生指數(shù)較其他土壤性質(zhì)能夠迅速地響應(yīng)施肥管理(有機(jī)肥和無機(jī)肥)、作物體系、耕作和體閑以及土地利用方
2、式的差異。在施肥管理方面的研究表明，施用有機(jī)肥可以顯著提高土壤微生物量碳、氮的含量及基礎(chǔ)呼吸強(qiáng)度，其中隨著有機(jī)肥施用量的增加，土壤微生物量碳、氮的增加越明顯。施用無機(jī)肥對于土壤呼吸沒有顯著影響，但是由于氣候條件、土壤類型以及耕作施肥的復(fù)雜多樣性，其對土壤微生物量的影響不盡相同。李娟等報道，灌溉褐潮土上配合施用氮、磷、鉀肥較不施肥土壤顯著增加土壤微生物量碳、氮，而旱作褐土上適量施用氮磷無機(jī)肥與不施肥相比，土壤微生物量碳、氮沒有顯著差異目前，測定微生物量碳最常用的方法是氯仿薰蒸浸提法，它最大的優(yōu)點是簡單快速，可應(yīng)用于淹水土壤的微生物量測定，并且可以與同位
3、素技術(shù)結(jié)合，研究土壤和環(huán)境的物質(zhì)循環(huán)及轉(zhuǎn)化。一、采樣與樣品預(yù)處理??土壤樣品的采集方法和要求與測定其它土壤性質(zhì)時沒有本質(zhì)區(qū)別。采集到的新鮮土壤樣品立即去除植物殘體、根系和可見的土壤動物(如蚯蚓)等,然后迅速過篩(2～3?mm)，或放在低溫下(2～4℃)保存。如果土壤太濕無法過篩，進(jìn)行晾干時，必須經(jīng)常翻動土壤，避免局部風(fēng)干導(dǎo)致微生物死亡。過篩的土壤樣品調(diào)節(jié)到田間持水量的50%左右，在室溫下于密閉裝置中預(yù)培養(yǎng)1周，密閉容器中要放入兩個50mL的燒杯，分別加入水和稀NaOH，以保持其濕度和吸收釋放的CO2。預(yù)培養(yǎng)后的土壤最好立即分析，若需要放置一段時間，在
4、低溫下(2～4℃)最好不要超過10d。?土壤田間持水量采用改進(jìn)的Shaw（1958）方法測定。在漏斗下端連接一帶夾子的橡膠管，漏斗用玻璃纖維堵塞。取50.00?g土壤于漏斗中，夾緊橡膠管，加入50?ml水，保持30?min，再打開夾子使多余的水流入量筒，30?min后測定流出的水量，同時測定土壤濕度，計算土壤田間持水量，用烘干土壤質(zhì)量表示。—林啟美老師文件二、方法—氯仿薰蒸浸提法（FE）?1、方法原理?土壤經(jīng)氯仿薰蒸處理，微生物被殺死，細(xì)胞破裂后，細(xì)胞內(nèi)容物釋放到土壤中，導(dǎo)致土壤中的可提取的碳大幅度增加。通過測定浸提液中全碳的含量可以計算土壤微生物量
5、碳。?浸提液中碳可用重鉻酸鉀容量法測定，也可用微量碳分析儀測定。此處介紹比較簡單的重鉻酸鉀容量方法。?2、儀器及設(shè)備?培養(yǎng)箱；真空干燥器；真空泵；往復(fù)式振蕩機(jī)(速率200rev/min)；冰柜；磷酸浴。??3、試劑?1.無乙醇氯仿：量取500?mL?氯仿于1000?mL的分液漏斗中，加入50mL硫酸溶液[j(H2SO4)=5%]，充分搖勻，棄除上層硫酸溶液，如此進(jìn)行3次。再加入50?mL去離子水，同上搖勻，棄去上部的水分，如此進(jìn)行5次。得到純氯仿存放在棕色瓶中，并加入約20g無水K2CO3，在冰箱的冷藏室中保存?zhèn)溆?。（試劑濃硫?j(H2SO4)=9
6、5~98%?，稀釋19倍）?2.硫酸鉀溶液[c(K2SO4)=?0.5?mol·L-1]:?稱取硫酸鉀（K2SO4,化學(xué)純）87.10g，加熱溶于去離子水中，稀釋至1L。(需加熱溶解)?3.重鉻酸鉀[c(1/6K2Cr2O7)=0.2000?mol·L-1]:?稱取經(jīng)130攝氏度烘干2～3h的重鉻酸鉀（K2Cr2O7分析純）9.8110g，溶于1000mL的去離子水中。?4.重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：[c(1/6K2Cr2O7)=0.1000?mol·L-1]:?稱取經(jīng)130?oC烘干2～3h的重鉻酸鉀（K2Cr2O7，分析純）4.9055g，溶于1000m
7、L的去離子水中。?5.鄰啡羅啉指示劑：稱取鄰啡羅啉指示劑[C12H8N2·H2O，分析純]1.49g，溶于含有0.70g?FeSO4·7H2O的100mL去離子水中，密閉保存于棕色瓶中。?6.硫酸亞鐵溶液[c(FeSO4)=0.05?mol·L-1]：稱取硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)約13.9005g，溶解于600～800mL去離子水中，加濃硫酸（化學(xué)純）20mL，攪拌均勻，定容至1000mL，于棕色瓶中保存。此溶液不穩(wěn)定，需在用時每天標(biāo)定其濃度。7.硫酸亞鐵溶液濃度的標(biāo)定：??吸取重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00mL，放入100mL三角瓶中，加水約20
8、mL,加濃硫酸5mL和鄰啡羅啉指示劑2滴，用FeSO4溶液滴定，根據(jù)FeSO4溶液的消耗量即可計算FeSO4
