DEPC水的配制

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1、1.首先需要明確，DEPC（焦碳酸二乙酯）是一種油狀液體，跟水難容。故配置時(shí)室溫通風(fēng)櫥中完成，常常需要放置過夜。DEPC在高壓下會(huì)分解為CO2和乙醇，所以，如果你的DEPC水是用來處理實(shí)驗(yàn)器具的，就不能高壓；如果你的DEPC水是用來配制試劑的，那么你就可以高壓。不過不管你配制DEPC水的目的是什么，在配制DEPC水時(shí)的雙蒸水都不需要高壓滅菌，因?yàn)榧幢闶悄阌脕硖幚砥骶撸谂葸^DEPC水之后還必須要經(jīng)過高壓滅菌滴。泡實(shí)驗(yàn)器具的DEPC水的配制（0.1%）：1000ml雙蒸水中加1mlDEPC，放在1

2、000ml容量瓶中靜置4小時(shí)后或過夜備用。保存方法：封閉冷藏備用。最好分裝小瓶來用，盡量避免污染。畢竟搞一次也不容易。配試劑的DEPC水的配制（0.1%）：100ml鹽水瓶內(nèi)裝40ml雙蒸水，加40ulDEPC，37℃過夜，高壓處理121c，25minDEPC分解成二氧化碳和酒精，封閉冷藏備用。最好分裝小瓶來用，盡量避免污染。搞一次也不容易。2.焦碳酸二乙酯（DEPC）DEPC即diethylpyrocarbonate。分子式為C6H10O5，分子量為162.14，無色、澄清透明的液體。是一種強(qiáng)

3、烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。DEPC可以抑制植物細(xì)胞上的NSCC，是常用的NSCC抑制劑.DEPC毒性1．DEPC(diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)是一種高效烷化劑。DEPC不穩(wěn)定，在水溶液中會(huì)分解成乙醇和二氧化碳，155℃時(shí)也會(huì)分解。DEPC遇到氨水會(huì)發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生氨基甲酸乙酯。2．DEPC有刺激性，對(duì)眼睛和氣道粘膜有強(qiáng)刺激，在操作中應(yīng)盡量在通風(fēng)的條件下進(jìn)行，DEPC毒性并不是很強(qiáng)，但吸入的毒性是最

4、強(qiáng)的，使用時(shí)戴口罩，不小心沾到手上注意立即沖洗。3．DEPC是一種潛在的致癌物質(zhì)，主要是能生成乙酯基衍生物和乙酯類衍生物，其中尿烷是一種已知的致癌物質(zhì)。DEPC在水中的半衰期：25℃、磷酸緩沖液中其半衰期為4min（pH6）、9min（pH7）。Tris緩沖液中DEPC的降解會(huì)加快，25℃時(shí)，半衰期為1.25min（pH7.5）、0.37min（pH8.2）。DEPC加入到水中之后并不會(huì)立即溶解，而是形成小的球狀液滴（類似于油滴），需要徹底攪拌直至液滴消失才算混合均勻。此時(shí)的溶液才可以拿去高溫除

5、菌除DEPC。一般滅菌15min即可將DEPC徹底除去。（試驗(yàn)所用試劑也可用DEPC處理，加入DEPC至0.1%濃度，然后劇烈振蕩10分鐘，再煮沸15分鐘或高壓滅菌以消除殘存的DEPC，否則DEPC也能和腺嘌呤作用而破壞mRNA活性。）配置加0.1%DEPC到去離子水中，混勻過夜，然后高溫高壓121℃，20min，DEPC即降解成二氧化碳和水，無毒。用途DEPC是一種有效的核酸酶抑制劑，它能夠與很多酶的-NH，-SH或-OH等基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，從而破壞酶的活性位點(diǎn)。一般，常用濃度為0.1%（1L水中

6、加入1mLDEPC）的DEPC來作為RNA酶的抑制劑。比如，進(jìn)行RNA實(shí)驗(yàn)時(shí)，要用DEPC處理實(shí)驗(yàn)所用的水和各種溶液。我們通常所說的DEPC（處理）水是指用DEPC處理過并經(jīng)高溫高壓消毒的MiliQ純水。DEPC（處理）水可以用于RNA沉淀的溶解，含有RNA的各種反應(yīng)體系如反轉(zhuǎn)錄、siRNA的退火等，以及其它各種要求無RNase、DNase和proteinase的反應(yīng)體系。使用注意事項(xiàng)1、DEPC可能溶解掉某些塑料槍頭，因此，量取DEPC時(shí)要用玻璃器具。2、DEPC處理后的溶液要去除殘余的DEP

7、C，一般121℃滅菌15min即可，也可以將其煮沸15min以達(dá)到去除的效果?？赡軙?huì)殘留些許氣味，可以放心使用。3、因?yàn)镈EPC在Tris、HEPES等緩沖液中極易分解，因此不能直接用DEPC來處理Tris、HEPES等緩沖液。這種情況下，要先用DEPC處理水，然后再用DEPC處理過的水來配制緩沖液。4、AlthoughH2OpreparedwithreverseosmosissystemslikeMilli-QisfreeofRNases,itcanbecontaminatedbymicrob

8、ialgrowthifthemachineandpipingarenotwellmaintained.Thisisespeciallyproblematicincentralisedwatersystemswithmetresofpiping.5、ThefruitysmellcomingfromageingDEPC-containingsolutionsstemsfromtheestersthataregeneratedwhenethanolproducedfromhydrolysisreact