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《結(jié)合條件對羊抗兔抗體連接到細(xì)菌磁小體影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)JournalofAgriculturalBiotechnology2006,14(3):423~428·研究論文·結(jié)合條件對羊抗兔抗體連接到細(xì)菌磁小體的影響陳繼峰1,2,3,1111112李穎,姜偉,王珍芳,孫建波,李健,李季倫,李紹華*(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物系,北京100094;2.中國科學(xué)院植物研究所,北京10093;3.鄭州大學(xué)生物工程系,鄭州450001)摘要:用羊抗兔抗體進(jìn)行抗體連接到細(xì)菌磁小體(BMPs)實(shí)驗(yàn),以探討結(jié)合條件對抗體連接效率(以每毫克BMPs上連接抗體的微克數(shù)表示,單位為μg/mg)的影響。實(shí)驗(yàn)表明,冷凍干燥后的B
2、MPs的抗體連接效率降低36%~55%;在液氮中(-196℃)預(yù)處理的抗體連接效率顯著高于在-70℃和-20℃預(yù)處理的。室溫(15℃)下反應(yīng)18h的抗體連接效率最高,為64.06μg/mg,明顯高于其它溫度和連接時(shí)間的。反應(yīng)體系中,BMPs用量由5mg降到0.1mg,抗體用量由10μg增加到300μg時(shí),抗體連接效率逐漸上升,當(dāng)BMPs用量為0.1mg,抗體用量為300μg時(shí),抗體連接效率達(dá)762.37μg/mg。PBS、HEPES、Tris-HCl、MOPS、VBS以及磷酸鹽等溶液可用于抗體連接到BMPs體系中,在通常使用的緩沖液pH和濃度下,幾種溶液的抗體
3、連接效率變化范圍為46.28±0.58~90.83±1.64μg/mg;并且不同的溶液有相應(yīng)的使抗體連接效率達(dá)到最高時(shí)的pH和溶液濃度,當(dāng)HEPES的pH為3.5,濃度為20mmol/L;Na3PO4的pH為5.6,濃度為5mmol/L時(shí),抗體連接效率分別為108.01和76.78μg/mg。對連接到BMPs上的抗體進(jìn)行SDS-PAGE定性檢測結(jié)果表明,抗體連接到了BMPs的膜上。關(guān)鍵詞:細(xì)菌磁小體;羊抗兔抗體;結(jié)合條件;抗體連接效率中圖分類號:S182S188文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1006-1304(2006)03-0423-06EffectsofConj
4、ugatingConditionsonGoatAnti-rabbitAntibodyImmobilizationontoBacterialMagneticParticlesCHENJi-feng1,2,3,LIYing1,JIANGWei1,WANGZheng-fang1,SUNJian-bo1,LiJian1,LIJi-lun1,LIShao-hua2*(1.DepartmentofMicrobiology,CollegeofBiologicalSciences,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094,China;
5、2.InstituteofBotany,ChineseAcademyofSciences,Beijing100093,China;3.DepartmentofBiotechnology,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001,China)Abstract:Goatanti-rabbitimmunoglobulinG(antibody)wasappliedasasampleforstudyingantibodyconjugationontobacteri-almagneticparticles(BMPs).Thecondition
6、sforthisstudyweredifferentpre-treatmentBMPs(-196℃,-70℃and-20℃for5h)forfreeze-dry,temperatureswithvariedconjugationdurations,amountofBMPsandantibody,conjugationbuffers,andbufferpHandconcentrations.Theresultsshowedthatdifferentpre-treatmentsforfreeze-dryBMPshaddifferentlinkagerateofan
7、tibody(LRA).Liquidnitrogen(-196℃)asapre-treatmentfor5h,theLRAwassignificantlyhigherthanthatof-70℃and-20℃pre-treatments.Anykindsofpre-treatmentsandfreeze-dryBMPs,theLRAsweredecreased36%~55%comparedwithnofreeze-dryBMPs.Roomtemperature(about15℃),andincubationfor18hresultedinthehighestL
8、RA(64.06μg/mg)inthe
