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《高速逆流色譜分離純化木蝴蝶中黃芩素和白楊黃素》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第34卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究簡報特刊2006年9月ChineseJournalofAnalyticalChemistryS243～S246高速逆流色譜分離純化木蝴蝶中黃芩素和白楊黃素3孫愛玲孫清華柳仁民(聊城大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,聊城252059)摘要建立了高速逆流色譜分離純化木蝴蝶黃芩素和白楊黃素的方法。兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水,固定相為5∶5∶5∶5(V/V)體系的上相,以5∶5∶5∶5(V/V)和5∶5∶7∶3(V/V)體系的下相為流動相進行梯度洗脫。從300mg木蝴蝶粗提物中一步分離純化得到2515m
2、g黃芩素和3616mg白楊黃素。經(jīng)高效液相113色譜分析,純度分別為9912%和100%。其化學(xué)結(jié)構(gòu)由H2NMR和C2NMR鑒定。關(guān)鍵詞高速逆流色譜,木蝴蝶,黃芩素,白楊黃素1引言木蝴蝶為紫葳科植物木蝴蝶(Oroxylumindicum(L.)Vent.)的干燥成熟種子,是我國常用中草藥[1]之一,并被收入中國藥典,具有止痛、止咳及清熱等作用,用于治療感冒、支氣管炎和其它一些疾病。黃芩素和白楊黃素為木蝴蝶主要有效成分,具有清熱、抗過敏,抗氧化和抗癌等功能。近幾年來對木蝴蝶中黃酮類成[2～4]分的研究非常活躍。因此,建立相關(guān)成分的高效分離純
3、化方法具有重要意義。高速逆流色譜(HSCCC)是一種不使用固態(tài)支撐體或載體的液液分配色譜技術(shù)。它克服了固相載體對樣品的吸圖1黃芩素(R=OH)和白楊黃素(R=H)的附損失、變性等缺點,并可以在短時間內(nèi)實現(xiàn)高效制備性分化學(xué)結(jié)構(gòu)式[5]離,因而在中藥有效成分的分離與純化方面得到了廣泛Fig.1Chemicalstructureofbaicalein(R=OH)[6～11]的應(yīng)用。本實驗應(yīng)用HSCCC從木蝴蝶藥材中成功地andchrysin(R=H)分離純化出黃芩素和白楊黃素(結(jié)構(gòu)見圖1),經(jīng)高效液相色譜(HPLC)分析,其純度分別為9912%
4、和100%。2實驗部分2.1儀器、試劑與材料TBE2300A高速逆流色譜儀(上海同田生化技術(shù)有限公司);'KTAprime泵及檢測系統(tǒng)(瑞士安瑪西亞生物有限公司);HX21050恒溫器(北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司);1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);色譜柱:SpherigelODSC18(250mm×416mm,5μm);Mercuryplus400核磁共振儀(美國瓦里安公司)。粗提物的制備及HSCCC分離用溶劑(石油醚、乙酸乙酯、甲醇等)均為分析純(天津化學(xué)試劑三廠)。HPLC分析用甲醇為色譜純(禹城化工廠),實驗用水為二次蒸餾
5、水。木蝴蝶藥材購于聊城市利民大藥店,經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)張永清教授鑒定為正品藥材。2.2樣品制備取100g于60℃恒重的木蝴蝶藥材粉碎,用700mL70%甲醇回流提取3次(每次2h),合并提取液,減壓蒸餾,得浸膏3413g。浸膏加水溶解后用其3倍體積的正丁醇萃取3次,合并正丁醇部分,減壓蒸餾回收溶劑,得浸膏1616g。此浸膏再用石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水(5∶5∶5∶5,V/V)體系的下相100mL溶解后,取等體積的上相萃取4次,合并上相部分,減壓蒸餾得淡黃綠色粉末(即木蝴蝶藥材的粗提物)518g,放置冰箱內(nèi)備用。2005209206收稿;2
6、006201228接受244分析化學(xué)第34卷2.3分配系數(shù)的測定本實驗用HPLC測定樣品在不同溶劑體系的分配系數(shù)。取適量木蝴蝶藥材的粗提物于5mL試管中,用預(yù)先達到分配平衡的兩相溶劑系統(tǒng)的下相將其溶解,用HPLC進行檢測,峰面積為A1。然后取等體積的上相加入此溶液,劇烈振蕩使其充分混合,待達到分離平衡后,再取下相用HPLC檢測,峰面積為A2。分配系數(shù)K則按下式計算:K=(A1-A2)/A2。2.4兩相溶劑系統(tǒng)及樣品溶液的制備本實驗所用溶劑系統(tǒng)為石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水(5∶5∶5∶5和5∶5∶8∶2,V/V),按其比例分別將各種溶劑加入
7、分液漏斗中,劇烈振蕩使溶液充分混合,分相平衡后,分出上相和下相,使用前分別用超聲波脫氣30min。取大約300mg木蝴蝶藥材粗提物,溶于4mL石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水(5∶5∶5∶5,V/V)上相中,振蕩使之完全溶解,以備HSCCC進樣。2.5HSCCC分離過程用'KTAprime系統(tǒng)將石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水(5∶5∶5∶5,V/V)的上相(固定相)和下相(流動相)以40∶60的體積比同時泵入HSCCC螺旋管。當(dāng)螺旋管完全充滿后,僅以210mL/min的流速泵入流動相,同時將螺旋管轉(zhuǎn)速調(diào)為850r/min。達到動力學(xué)平衡后(大約30
8、min),將樣品通過進樣閥注入分離螺旋管。進樣80min后,進行梯度洗脫。流動相在50min內(nèi)由100%的5∶5∶5∶5體系的下相變?yōu)?00%的5∶5∶7∶3體系的下相。分離溫度控制在25℃,
