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《胰蛋白酶的制備及其在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、天然產(chǎn)物研究與開發(fā)NatProdResDev2009,21:101121014文章編號(hào):100126880(2009)0621011204胰蛋白酶的制備及其在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用研究131111112李明生,李倬,喬自林,馮若飛,馬忠仁,馮玉萍,侯蘭新,張福梅12西北民族大學(xué)生物工程與技術(shù)國(guó)家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;西北民族大學(xué)理科實(shí)驗(yàn)中心,蘭州730030摘要:無菌采集健康牛胰臟,用0.125mol/L的硫酸對(duì)牛胰臟進(jìn)行預(yù)處理和保存,并對(duì)原材料的細(xì)菌、真菌、內(nèi)毒素、支原體、噬菌體和一些病毒外源因子進(jìn)行檢測(cè),篩選合格原料。通過鹽析、CM2Sepharose2FF層析、超濾等方法對(duì)胰蛋
2、白酶進(jìn)行提取和純化。結(jié)果表明:經(jīng)篩選原料提純的胰蛋白酶通過細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)240h后,細(xì)胞生長(zhǎng)良好,形態(tài)正常,而未經(jīng)篩選直接提取的胰蛋白酶通過細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)144h后,細(xì)胞出現(xiàn)拉絲、病變等異常情況。關(guān)鍵詞:胰蛋白酶;原料;控制中圖分類號(hào):Q814.1;Q814.9;R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:APreparationandTrypsininCellCultureAppliedResearch13111LIMing2sheng,LIZhuo,QIAOZi2lin,FENGRuo2fei,1112MAZhong2ren,FENGYu2ping,HOULan2xin,ZHANGFu2mei1
3、KeyBio2engineering&TechnologyLaboratoryofStateEthnicAffairsCommissionofNorthwestUniversityforNationalities;2ScienceExperimentCenterofNorthwestUniversityforNationalities,Lanzhou730030,ChinaAbstract:Asepticacquisitionhealthycattlepancreas,with0.125mol/Lsulfateofbovinepancreasprocessingandpr
4、es2ervation,andtherawmaterialofbacteria,fungi,endotoxin,Mycoplasma,phageandsomevirusdetectionofexogenousfactors,screeningqualifiedrawmaterials.Throughsalting2out,FF2CM2Sepharosechromatography,ultrafiltrationmethodoftrypsintoextractandpurify,theresultsshowedthattheselectionofrawmaterialsth
5、roughthepurificationoftrypsinandexperimentalcells240h(5generations),thecellgrowthgood,normalmorphology,andwithoutscreeningtrypsindi2rectlyfromthecellsthroughtheexperimental144h,thecellsweredrawinglesionssuchasabnormal.Keywords:trypsin;rawmaterials;control胰蛋白酶是一種動(dòng)物來源的蛋白水解酶,廣泛料沒有進(jìn)行嚴(yán)格的篩選,質(zhì)量控
6、制的研究?jī)?nèi)容也不存在于動(dòng)物的胰臟,是一些生物制藥的主要原輔材夠全面。本實(shí)驗(yàn)選擇健康的牛源,在無菌環(huán)境下進(jìn)料。隨著生物制藥的不斷發(fā)展,因胰蛋白酶質(zhì)量問行采集牛胰臟;采用合理、有效、安全的方法對(duì)原材題造成生物制藥的質(zhì)量安全問題也越來越引起人們料進(jìn)行處理和保存,并對(duì)采集的原料進(jìn)行細(xì)菌、真的關(guān)注。目前,胰蛋白酶在細(xì)胞工程方面的應(yīng)用主菌、內(nèi)毒素、支原體、噬菌體和一些病毒外源因子的要體現(xiàn)在疫苗的生產(chǎn)與研究,最終產(chǎn)品直接或間接檢測(cè),通過檢驗(yàn)篩選合格的原料,為后續(xù)的胰蛋白酶的用于人體,因此,胰蛋白酶的質(zhì)量好壞直接關(guān)系到提取工藝和質(zhì)量控制提供保障。人類的健康,甚至生命安全。要控制好胰蛋白酶
7、的1材料和方法質(zhì)量安全,對(duì)原材料的把關(guān)是關(guān)鍵,由于胰蛋白酶來源于生物體,其成分復(fù)雜,單靠檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)很難達(dá)到質(zhì)1.1材料量安全。一旦由胰蛋白酶途經(jīng)帶入,會(huì)大大影響到1.1.1主要材料試劑細(xì)胞培養(yǎng),甚至影響到疫苗的產(chǎn)量和質(zhì)量。國(guó)內(nèi)對(duì)牛胰臟、實(shí)驗(yàn)用所有細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)用所有培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)用胰蛋白酶制備尚不成熟,且大都對(duì)原材(均由蘭州民海生物工程有限公司提供)、N2苯甲酰2L2精氨酸乙酯鹽酸鹽(上海如吉科技發(fā)展有限公收稿日期:2009202216接受日期:2009206202司)、胰蛋白酶1:250(Hyclone)、鱟試劑(湛江,安度基金項(xiàng)
