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《實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)（HemagglutinationandHemagglutinationInhibition,HAandHI）徐曉娟2011.10.31一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)材料四、實(shí)驗(yàn)步驟五、結(jié)果判定了解血凝和血凝抑制試驗(yàn)的原理。了解血凝價(jià)和血凝單位的概念。掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的操作步驟和結(jié)果判定的方法。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理（一）血凝試驗(yàn)（HA）一些病毒能夠促使動(dòng)物如雞、鵝、豚鼠和人的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，叫做血凝試驗(yàn)。病毒凝集紅細(xì)胞是一種較為普遍的現(xiàn)象，可以作為鑒定病毒的一個(gè)指標(biāo)。HA試驗(yàn)的原理圖一層RBC均勻鋪在孔
2、底者為++++；基本同上，但邊緣不整齊，有下墜傾向者為+++；RBC在孔底形成一個(gè)環(huán)狀，四周有小凝集塊者為++；RBC在孔底形成一個(gè)小團(tuán)，但邊緣不光滑，四周有小凝集塊為+;RBC在孔底形成一個(gè)小團(tuán)，邊緣光滑，四周有似小凝集塊者為±;紅細(xì)胞在孔底形成一個(gè)小團(tuán)，邊緣光滑，整齊者為-。++++++++++-血凝試驗(yàn)結(jié)果判定1:211:221:231:241:251:261:271:281:291:210CC血凝價(jià)：能使紅細(xì)胞產(chǎn)生50%凝集的病毒最高稀釋度。（二）血凝抑制試驗(yàn)（HI）當(dāng)病毒懸液中加入特異性抗體時(shí)，這種紅細(xì)胞凝集的現(xiàn)象就被抑制，稱紅
3、細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)，即血凝抑制試驗(yàn)。因此，可以用已知病毒來檢測被檢血清中的相應(yīng)抗體，也可以用已知血清來鑒定未知病毒。HA試驗(yàn)的原理圖HI試驗(yàn)的原理圖三、實(shí)驗(yàn)材料雞新城疫病毒：雞新城疫弱毒株（Lasota）接種雞胚、收獲尿囊液制備。雞紅細(xì)胞：采集健康雞血液，以阿氏液抗凝，以生理鹽水洗滌3~5次，將血漿、白細(xì)胞等充分洗去，用生理鹽水配置成1%紅細(xì)胞懸液使用。0.85%生理鹽水。被檢血清，采自被檢雞的健康血清。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）血凝試驗(yàn)（HA）在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理鹽水。在第1孔中加入50μl病毒抗原，反復(fù)吸取混勻后吸50μl
4、到第2孔，如此倍比稀釋直到第10孔，混勻后棄50μl；最后兩孔（11、12）為紅細(xì)胞對(duì)照。將1%的紅細(xì)胞輕輕搖動(dòng)混勻，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震蕩，37℃靜置25~30min后觀察結(jié)果。病毒液的血凝價(jià)是1:2？。血凝價(jià)：能使紅細(xì)胞產(chǎn)生50%凝集的病毒最高稀釋度。（二）血凝抑制試驗(yàn)（HI）在血凝板的1~11孔加入25μl生理鹽水，最后一孔（12孔）加50μl。第1孔加待檢血清25μl，混勻后吸25μl至第2孔，倍比稀釋直至第10孔，混勻后棄25μl。從1~11孔，每空加稀釋好的25μl4個(gè)血凝單位的病毒懸液。37℃靜置25~30
5、min如果血凝價(jià)為1:28，那么4個(gè)血凝單位就是1:26第11、12孔不加第12孔不加血凝價(jià)：能使紅細(xì)胞產(chǎn)生50%凝集的病毒最高稀釋度。1個(gè)血凝單位：能使50%的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒懸液。病毒濃度1:211:221:231:241:251:261:271:281:291:210CC將1%的紅細(xì)胞輕輕搖動(dòng)混勻，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震蕩，在37℃靜置25~30min后觀察結(jié)果。結(jié)果判定：以紅細(xì)胞凝集100%的抑制作為結(jié)果判定的終點(diǎn)。血凝抑制價(jià)是1:2？，被檢血清為陰/陽性?！?:24為陽性＜1:22為陰性＝1:23為可疑血凝抑
6、制價(jià)第11孔為病毒對(duì)照，應(yīng)該完全凝集，第12孔為細(xì)胞對(duì)照，應(yīng)該完全沉積到孔底。HAHI細(xì)胞對(duì)照五、結(jié)果判定血凝價(jià)是1：？；血凝抑制價(jià)是1：？；被檢血清為陰性還是陽性?
