玉米小斑病抗性鑒定

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1、一、實驗目的學習和初步掌握玉米小斑病抗性鑒定技術。1、玉米小斑病的主要癥狀特征觀察。2、玉米小斑病的接種方法。3、玉米小斑病的病情與抗性級別鑒定。玉米小斑?。℉elminthosporiummaydis）是溫曖潮濕地區(qū)玉米產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生的一種病害，也是我國玉米生產(chǎn)上的主要病害之一，流行年份往往造成嚴重損失。選育抗病自交系和雜交種，是防治小斑病最經(jīng)濟有效的措施。玉米從幼苗到成株均可發(fā)病，通常從下部葉片開始向上蔓延，先從葉面產(chǎn)生褐色小點，后擴大成2~3mm的褐色病斑，病斑受葉脈限制，常常成不規(guī)則形。發(fā)病適溫為25~30

2、℃。二、內容說明內容說明(續(xù))根據(jù)小斑病菌侵染特點的不同，可將小斑病菌劃分為O小種和T小種兩個生理小種。T小種對T型細胞質有?；拘?，故育種上應盡量避免使用有?；缘募毎|類型。玉米對小斑病抗性表現(xiàn)亦有兩種，一是多基因控制，表現(xiàn)為病斑數(shù)量少，在保濕條件下，病斑形成的孢子少，孢子形成時間較長。二是由隱性單基因rhm控制，表現(xiàn)為小的褪綠病斑。鑒定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然誘發(fā)鑒定，大田誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定。但以人工接種鑒定較為可靠。（一）所需用品1、材料：供試玉米材料、玉米抗病和感病對照材料。玉米小斑病菌種，

3、T小種的培養(yǎng)物；上一季感染O小種小斑病的玉米植株病葉。2、儀器用具：高壓滅菌鍋、超凈工作臺、酒精燈、接種環(huán)、恒溫箱、燒杯、漏斗、試管、紗布、玻璃棒、培養(yǎng)皿、顯微鏡、小噴霧器、保濕罩等。3、藥品試劑：75%酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、瓊脂、馬鈴薯等。三、所需用品和操作方法用具（二）操作方法1.苗期接種鑒定（1）菌種的培養(yǎng)①病原菌的分離選取新鮮病葉作為分離材料，在滅菌室內進行操作。先將病斑剪成4~5mm2大小，約30~40塊，然后分別將病組織小塊置于0.1%升汞溶液中消毒1min，立即取出，按無菌操作方法投入無菌

4、水中清洗三次，每次2~3min。最后以無菌操作方法，將病斑組織按正方形四點排列，栽種在PDA平板培養(yǎng)基（去皮馬鈴薯20g，葡萄糖10~20g，瓊脂17~20g，水100ml）上，置25~30℃溫箱中培養(yǎng)約7天。②　菌種的純化選取培養(yǎng)性狀典型的菌落，按無菌操作方法移植到斜面培養(yǎng)基上（每個典型菌落移3管），然后再放在25℃恒溫下培養(yǎng)。待產(chǎn)生孢子后，選取菌落較一致的斜面1~2管，挑取一點，觀察孢子的形狀、分隔數(shù)、臍點特點。然后計測孢子大小。確認純種后，再用斜面培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)，讓其產(chǎn)生大量孢子后，置冰箱中保存待用。菌絲形

5、態(tài)（2）孢子懸浮液的制備用少量無菌水倒入已產(chǎn)孢子的斜面培養(yǎng)基試管中，猛力搖動沖洗孢子。也可輔以接種環(huán)表層刮除。最后將所有沖洗孢子液集中在潔凈的三角瓶中。用紗布濾去菌絲及培養(yǎng)基，濾液用蒸餾水稀釋，調至在100倍顯微鏡下每個視野有5個孢子濃度的懸浮液待用。（3）接種病菌接種小斑病的適宜時期是在玉米6個葉片左右。接種前在配制好的孢子液中加入2%蔗糖，以促進病菌孢子萌發(fā)。接種菌液量是每株1~2ml。用微型噴霧器均勻噴霧，噴后立即以塑料袋套盆保溫，置25℃左右溫度下保濕24小時。（4）病情鑒定和分級標準接種后7~10天即可

6、進行病情鑒定。鑒定應在同一天內完成。鑒定項目和標準如下：①　發(fā)病程度以葉片為單位進行鑒定。根據(jù)病斑占葉片面積的百分率，記載每片葉的感病程度。發(fā)病程度分為9級（表1）。鑒定接種部位的葉片，每株4片葉，每個供試材料10株共40片。以整株為單位，根據(jù)整株的發(fā)病情況，分為7個等級（表2）。而后，以葉片為單位，計算病葉率和病情指數(shù)。病情計算公式表1玉米小斑病葉片發(fā)病程度分級標準等級病斑占葉片面積（%）012345678012—56—1011—2021—3031—5051—70>700級1級2級3級4級5級6級7級8級表2玉

7、米小斑病整株發(fā)病程度分級標準級別全株葉片病斑占總葉面積（%）0全株葉片無病0.5植株下部葉片有零星病斑（占葉片面積10%以下）1植株下部葉片有少量病斑（占葉片面積11%~25%）2植株下部葉片有中量病斑（占葉片面積26%~50%）3植株下部葉片有多量病斑（占葉片面積51%以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，中上部葉片有中量病斑（占葉面積26%~50%），上部葉片有少量病斑（占葉面積10~25%）4植株下部葉片基本枯死，中部葉片有多量病斑（占葉面積50%以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，上部葉片有中量病斑（占葉面積26~50%）。5

8、全株基本枯死。0.5級1級2級3級4級5級0級病情鑒定和分級標準（續(xù)）②　病斑長度隨機測量40個獨立的病斑，每株4個，以mm為單位。③　抗病性的反應型病斑反應型分為三級，分級標準見表3。表3玉米小斑病抗性反應型分級標準病斑型病斑癥狀壞死型病斑中央的壞死部分為黃褐色，周圍有深色的邊緣，病斑周圍和兩端沒有暗綠色的浸潤區(qū)。萎蔫型病斑中央的壞死部分為灰褐色至近似灰白色，沒有深色邊