玉米小斑病抗性鑒定

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1、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和初步掌握玉米小斑病抗性鑒定技術(shù)。1、玉米小斑病的主要癥狀特征觀察。2、玉米小斑病的接種方法。3、玉米小斑病的病情與抗性級(jí)別鑒定。玉米小斑?。℉elminthosporiummaydis）是溫曖潮濕地區(qū)玉米產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生的一種病害，也是我國(guó)玉米生產(chǎn)上的主要病害之一，流行年份往往造成嚴(yán)重?fù)p失。選育抗病自交系和雜交種，是防治小斑病最經(jīng)濟(jì)有效的措施。玉米從幼苗到成株均可發(fā)病，通常從下部葉片開始向上蔓延，先從葉面產(chǎn)生褐色小點(diǎn)，后擴(kuò)大成2~3mm的褐色病斑，病斑受葉脈限制，常常成不規(guī)則形。發(fā)病適溫為25~30

2、℃。二、內(nèi)容說明內(nèi)容說明(續(xù))根據(jù)小斑病菌侵染特點(diǎn)的不同，可將小斑病菌劃分為O小種和T小種兩個(gè)生理小種。T小種對(duì)T型細(xì)胞質(zhì)有?；拘?，故育種上應(yīng)盡量避免使用有專化性的細(xì)胞質(zhì)類型。玉米對(duì)小斑病抗性表現(xiàn)亦有兩種，一是多基因控制，表現(xiàn)為病斑數(shù)量少，在保濕條件下，病斑形成的孢子少，孢子形成時(shí)間較長(zhǎng)。二是由隱性單基因rhm控制，表現(xiàn)為小的褪綠病斑。鑒定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然誘發(fā)鑒定，大田誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定。但以人工接種鑒定較為可靠。（一）所需用品1、材料：供試玉米材料、玉米抗病和感病對(duì)照材料。玉米小斑病菌種，

3、T小種的培養(yǎng)物；上一季感染O小種小斑病的玉米植株病葉。2、儀器用具：高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、酒精燈、接種環(huán)、恒溫箱、燒杯、漏斗、試管、紗布、玻璃棒、培養(yǎng)皿、顯微鏡、小噴霧器、保濕罩等。3、藥品試劑：75%酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、瓊脂、馬鈴薯等。三、所需用品和操作方法用具（二）操作方法1.苗期接種鑒定（1）菌種的培養(yǎng)①病原菌的分離選取新鮮病葉作為分離材料，在滅菌室內(nèi)進(jìn)行操作。先將病斑剪成4~5mm2大小，約30~40塊，然后分別將病組織小塊置于0.1%升汞溶液中消毒1min，立即取出，按無(wú)菌操作方法投入無(wú)菌

4、水中清洗三次，每次2~3min。最后以無(wú)菌操作方法，將病斑組織按正方形四點(diǎn)排列，栽種在PDA平板培養(yǎng)基（去皮馬鈴薯20g，葡萄糖10~20g，瓊脂17~20g，水100ml）上，置25~30℃溫箱中培養(yǎng)約7天。②　菌種的純化選取培養(yǎng)性狀典型的菌落，按無(wú)菌操作方法移植到斜面培養(yǎng)基上（每個(gè)典型菌落移3管），然后再放在25℃恒溫下培養(yǎng)。待產(chǎn)生孢子后，選取菌落較一致的斜面1~2管，挑取一點(diǎn)，觀察孢子的形狀、分隔數(shù)、臍點(diǎn)特點(diǎn)。然后計(jì)測(cè)孢子大小。確認(rèn)純種后，再用斜面培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，讓其產(chǎn)生大量孢子后，置冰箱中保存待用。菌絲形

5、態(tài)（2）孢子懸浮液的制備用少量無(wú)菌水倒入已產(chǎn)孢子的斜面培養(yǎng)基試管中，猛力搖動(dòng)沖洗孢子。也可輔以接種環(huán)表層刮除。最后將所有沖洗孢子液集中在潔凈的三角瓶中。用紗布濾去菌絲及培養(yǎng)基，濾液用蒸餾水稀釋，調(diào)至在100倍顯微鏡下每個(gè)視野有5個(gè)孢子濃度的懸浮液待用。（3）接種病菌接種小斑病的適宜時(shí)期是在玉米6個(gè)葉片左右。接種前在配制好的孢子液中加入2%蔗糖，以促進(jìn)病菌孢子萌發(fā)。接種菌液量是每株1~2ml。用微型噴霧器均勻噴霧，噴后立即以塑料袋套盆保溫，置25℃左右溫度下保濕24小時(shí)。（4）病情鑒定和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)接種后7~10天即可

6、進(jìn)行病情鑒定。鑒定應(yīng)在同一天內(nèi)完成。鑒定項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)如下：①　發(fā)病程度以葉片為單位進(jìn)行鑒定。根據(jù)病斑占葉片面積的百分率，記載每片葉的感病程度。發(fā)病程度分為9級(jí)（表1）。鑒定接種部位的葉片，每株4片葉，每個(gè)供試材料10株共40片。以整株為單位，根據(jù)整株的發(fā)病情況，分為7個(gè)等級(jí)（表2）。而后，以葉片為單位，計(jì)算病葉率和病情指數(shù)。病情計(jì)算公式表1玉米小斑病葉片發(fā)病程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)等級(jí)病斑占葉片面積（%）012345678012—56—1011—2021—3031—5051—70>700級(jí)1級(jí)2級(jí)3級(jí)4級(jí)5級(jí)6級(jí)7級(jí)8級(jí)表2玉

7、米小斑病整株發(fā)病程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別全株葉片病斑占總?cè)~面積（%）0全株葉片無(wú)病0.5植株下部葉片有零星病斑（占葉片面積10%以下）1植株下部葉片有少量病斑（占葉片面積11%~25%）2植株下部葉片有中量病斑（占葉片面積26%~50%）3植株下部葉片有多量病斑（占葉片面積51%以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，中上部葉片有中量病斑（占葉面積26%~50%），上部葉片有少量病斑（占葉面積10~25%）4植株下部葉片基本枯死，中部葉片有多量病斑（占葉面積50%以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，上部葉片有中量病斑（占葉面積26~50%）。5

8、全株基本枯死。0.5級(jí)1級(jí)2級(jí)3級(jí)4級(jí)5級(jí)0級(jí)病情鑒定和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（續(xù)）②　病斑長(zhǎng)度隨機(jī)測(cè)量40個(gè)獨(dú)立的病斑，每株4個(gè)，以mm為單位。③　抗病性的反應(yīng)型病斑反應(yīng)型分為三級(jí)，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見表3。表3玉米小斑病抗性反應(yīng)型分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)病斑型病斑癥狀壞死型病斑中央的壞死部分為黃褐色，周圍有深色的邊緣，病斑周圍和兩端沒有暗綠色的浸潤(rùn)區(qū)。萎蔫型病斑中央的壞死部分為灰褐色至近似灰白色，沒有深色邊