葡萄糖氧化酶法測定血糖濃度

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1、生物化學與分子生物學專業(yè)XXX郵箱:葡萄糖氧化酶法測定血糖濃度1.掌握血糖測定原理，計算方法，參考正常值，臨床意義。2.了解尿糖的測定及意義。1.收集耳緣靜脈血,制備血漿,葡萄糖氧化法比色測定血糖濃度。2.收集尿液,班氏法測定。一.實驗要求二.實驗內(nèi)容血糖（bloodglucose,BG）指血漿（清）中的糖類物質(zhì)，主要為葡萄糖。一.血糖的來源：食物、糖原的分解、糖異生。二.血糖的去路：有氧氧化、轉(zhuǎn)換成非糖物質(zhì)、尿排出、糖酵解。血糖正常血糖濃度:3.9-6.1mmol/L(成年人空腹)低血糖:低于2.

2、8mmol/L高血糖:超過7.8mmol/L2.低血糖的因素：胰島素、磺脲類藥、飲酒、嚴重饑餓高血糖的因素：進食、情緒緊張時、糖尿病.3.糖尿病的診斷和治療監(jiān)視、新生兒低血糖癥等.腎上腺素由腎上腺髓質(zhì)分泌的一種兒茶酚胺激素。腎上腺素升高血糖機制：在應(yīng)激狀態(tài)、內(nèi)臟神經(jīng)刺激和低血糖等情況下，腎上腺素被釋放入血液循環(huán)，促進糖原分解并升高血糖，促進脂肪分解，促進非糖物質(zhì)向血糖的轉(zhuǎn)化，使血糖濃度增大。腎上腺素adrenaline;epinephrine一、血糖測定福林-酚試劑法葡萄糖氧化酶法鄰甲苯胺法葡萄糖氧

3、化酶法原理葡萄糖＋O2＋H2O葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）氧化，37oCH2O2＋苯酚＋4-氨基安替吡啉H2O＋紅色醌亞胺+O237oC辣根過氧化物酶（POD）Trinder反應(yīng)溶液在505nm下有吸收峰,可用比色法測定,得出葡萄糖的濃度。標準濃度法A標=KC標LA樣=KC樣LC樣=A樣A標×C標【試劑】?酶酚混合試劑（PH7.0）5mmol/L葡萄糖標準應(yīng)用液班氏試劑【器材】試管、試管架、吸量管、移液槍、恒溫水浴、722型分光光度計。實驗前準備【標本】1.血漿應(yīng)在血液采集1小時內(nèi)盡早分

4、離。具體操作（1）稱重；（2）取血：找到耳緣靜脈，二甲苯擦拭，涂薄層凡士林（有何作用）。用三棱針刺破耳緣靜脈放血(自然血流)，將血液收集于草酸鈉抗凝管內(nèi)（邊接邊搖,以防凝固），取約5ml。離心，2000rpm，10min，取上清，編號；（3）注射激素后再取血:皮下注射腎上腺素(0.4mg/kg體重)，記錄在注射時間。30min后取血5ml于抗凝管內(nèi),離心，2000rpm，10min，取上清，編號。（4）取4支試管，按下表加入試劑:標準(ml)正常(ml)注射后(ml)空白(ml)血清樣品葡萄糖標準液

5、蒸餾水酶酚混合試劑–0.02–3.000.02––3.000.02––3.00––0.023.00將各管充分混勻，37℃水浴中保溫15min；取出冷卻至室溫后，505nm處比色；以空白管調(diào)零，讀取標準管及測定管光密度值。計算：測定管葡萄糖含量（mmol/L）＝測定管光密度標準管光密度×51.注射前后的血糖濃度2.注射后血糖濃度增高率A腎-A正A正×100%增高率=結(jié)果記錄標準(ml)正常(ml)注射激素后(ml)空白(ml)A血糖濃度增高率尿糖是指尿中的糖類，主要是指尿中的葡萄糖。正常情況下，腎小管

6、能將腎小球濾過的葡萄糖全部重吸收回血液，當血糖>腎糖閾8.96-10.08mmol/L,超過腎小管的重吸收能力,部分葡萄糖隨尿排出。尿糖的測定雖然不能單純作為糖尿病的診斷標準，但是從某種層面上也能反映一些問題。血漿尿糖尿糖動脈血血細胞、大分子蛋白質(zhì)等部分水、無機鹽、葡萄糖、維生素、尿素等重吸收近端小管二、二、1.班氏定性試驗：2.葡萄糖氧化酶試紙法（干化學法）：反應(yīng)原理同血糖葡萄糖氧化酶法。尿糖測定班氏定性試驗原理：利用葡萄糖或其它還原性物質(zhì)在堿性高溫環(huán)境中，將反應(yīng)液中Cu2+還原為亞銅離子Cu+，

7、形成黃色的氫氧化亞銅或紅色的氧化亞銅。根據(jù)顯色的程度，可對尿葡萄糖作定性及半定量檢測。(CHOH)nCHOCH2OH+2Cu2++4OH-COOH(CHOH)nCH2OH+2CuOH+H2O2CuOHH2O+Cu2O醛糖醛糖酸黃色或紅色操作步驟20滴班氏劑A尿液2滴B尿液2滴煮沸5min煮沸5min葡萄糖含量(g/L)試管變化結(jié)果符號無糖試劑仍清晰呈藍色，如有多量尿酸存在也可能少許藍灰色沉淀—微量0.5以下僅冷卻后有少量綠色沉淀+少量0.5~1煮沸約1min后，出現(xiàn)少量黃綠色沉淀++中等量1~2煮沸

8、約15s，即呈土黃色沉淀+++多量2以上開始煮時，即呈多量紅棕色沉淀++++【注意事項】操作到位，取量要準確，吸量管不能混用。血清分離后要及時的測定以免影響實驗結(jié)果。試劑中含疊氮鈉（0.95g/L）為防腐劑。不可入口！避免接觸皮膚及粘膜。應(yīng)采取必要的預防措施使用試劑。結(jié)果分析三.測定的血糖濃度異常：反應(yīng)不徹底引起的（偏低）葡萄糖標準溶液濃度有問題（偏高或偏低）移液器引起的（偏高或偏低）一.結(jié)果可報告范圍：本法對葡萄糖的檢測范圍為0.06～22.2mmol/L。當樣品測