生化檢驗中的各種空白概念

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1、生化檢驗中的各種空白概念對所謂"試劑空白""樣本空白""水空白""杯空白"等"空白"名詞,同學(xué)們可能會感到困惑.特此匯集了一下各種言論，并結(jié)合自己的理解,總結(jié)如下,希望大家指正和補充:空白概念區(qū)別要點:**空白=只含**的空白（吸光度）1、試劑空白：???由于生化測試測量的吸光度為相對吸光度，所以從理論上說，所有終點法的測試都需要把試劑本身的吸光度扣除。試劑本身的吸光度就是試劑空白。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把樣本換成蒸餾水來測量。??在傳統(tǒng)手工方法中,每次測定都要做至少三個管:測定管、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管。其中空

2、白管是試劑加蒸餾水，測出來也就是試劑空白。因為操作環(huán)境、儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性等變異，所以要求每次都要測定試劑空白，稱為實時試劑空白。???在全自動分析儀上，大體上是模擬手工操作。但許多全自動分析儀為追求速度，在設(shè)計上采用一些折中方法來測定試劑空白。以日立全系列生化儀為例。該系列分析儀是做不了實時試劑空白，因為它們?nèi)窍燃尤霕颖竞蠹釉噭?，為了折中，只好在定?biāo)時做一個試劑空白，保存起來，需要扣除試劑空白時再減這個預(yù)先保存的值。這種做法，對于比較穩(wěn)定的試劑來講，對結(jié)果影響不大。通俗的講，日立的儀器工作流程中首先是將標(biāo)本加入到比

3、色杯中，然后依次加入R1試劑、R2試劑，所以試劑空白在每個測定項目曲線中是無法看到的。但是7170從CALIBRATION中是可以看到的，S1ABS就是代表試劑空白吸光度，在CALIBRATION畫面里的下方找到ReactionMonitor（反應(yīng)監(jiān)察），其中STD(1)就是代表試劑空白反應(yīng)曲線.為了減小誤差，日立儀器會連續(xù)做兩次測定，所以你看到FIRST和SECOND兩條，計算時是取他們的平均值。做試劑空白目的之一就是觀察試劑是否穩(wěn)定，積極采取措施糾正。對于日立的這種試劑空白測定很多儀器都采用這種方法，也叫做試劑空白校

4、準(zhǔn)。??總的說來，自動生化儀上的試劑空白一般表現(xiàn)為零點吸光度，該吸光度是通過校準(zhǔn)確立的。2、樣本空白：??由于溶血、脂血、黃疸等情況，會導(dǎo)致樣本本身的吸光度對測試結(jié)果造成影響。所以對樣本本身吸光度的測量，即樣本空白，可以去除這方面的影響。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進行測量。自動生化儀上，很難界定樣本空白。與消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點:(1)在雙試劑測定時，加入試劑1和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白，所以有單試劑不能扣除樣本空白的說法。?（2）現(xiàn)在優(yōu)質(zhì)的試劑的抗干擾能力

5、都比較強，比如有些雙試劑，R1加入后先和樣本孵育一段時間，將血紅蛋白、脂肪、膽紅素等反應(yīng)掉，再加入R2開始測定反應(yīng)。在一定范圍內(nèi)都可以消除樣本空白。（3）現(xiàn)代全自動生化儀大多采用雙波長測定。雙波長測定的原則是根據(jù)干擾組分和待測物質(zhì)吸收光譜的峰形特征，選擇兩個波長和，使干擾組分在這兩個波長處的吸光系數(shù)相等，而使待測物質(zhì)在兩波長處的吸光系數(shù)有顯著差別。以兩波長分別測定分析溶液的吸光度，以兩個吸光度值之差(△A)計算。這也可以扣除一部分樣本空白。（4）有些儀器,例如日立系列,有專門的“血清信息”功能的設(shè)置。做法都是單獨占用一個

6、空白通道來計算，這也叫做樣品空白校準(zhǔn)。3、水空白：??比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意義主要是對光路系統(tǒng)進行檢查和校正，如光源，比色杯等，同時在計算中起到消除“杯差”的作用。日立7060中的CellBlank（杯空白）測定的就是水空白。定標(biāo)的意義：定標(biāo)就是要找出一個參考點，就是一個K值（或F值）。它是由儀器狀態(tài)和試劑狀態(tài)確定下來的。當(dāng)我們測定一個標(biāo)本時，無論您是用手工的方法或全自動生化分析儀，測出來的值只是一個吸光度，這個吸光度對我們沒有什么意義，我們要把這個吸光度轉(zhuǎn)化成一個濃度或是酶的活性。那就要乘上一個K值，計

7、算并打印出來的結(jié)果對我們就有意義了。K值就是我們通過定標(biāo)找出來的。一般上最低要求是由試劑空白與標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)過儀器測定出兩個吸光度。K=標(biāo)準(zhǔn)濃度/(A標(biāo)準(zhǔn)－A試劑空白)標(biāo)準(zhǔn)液的濃度我們是知道的，這兩個吸光度可以由儀器測出，這樣就得出一個K值。無論什么樣的標(biāo)本，用其吸光度乘以K值我們就得到了答案。因此，K值具有非常決定性的意義，可以決定標(biāo)本的準(zhǔn)確性。K值的決定因素：我們看看K值會受到什么影響呢？第一，標(biāo)準(zhǔn)液的濃度一定要準(zhǔn)確（標(biāo)準(zhǔn)液最好與標(biāo)本一樣是以血清為基質(zhì)的）。第二，標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度與試劑空白的吸光度一定要準(zhǔn)確。吸光度受儀器狀

8、況（注射器、反應(yīng)杯、清洗系統(tǒng)、針、攪拌棒等）、試劑狀況（成分、純度、用量及穩(wěn)定性）的影響，如果您的儀器相當(dāng)穩(wěn)定，試劑是影響K值的一個主要因素。如何確定K值是正確的？一般我們用質(zhì)控血清來檢查，最好是兩種水平的質(zhì)控來檢查，如果質(zhì)控結(jié)果很好，可以說,K值是準(zhǔn)確的，用這個K值計算出來病人的結(jié)果也是準(zhǔn)確的，所以K值非常關(guān)鍵。K