《急性毒性試驗》PPT課件

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1、急性毒性試驗急性毒性試驗(單次給藥毒性試驗)主要觀察對實驗動物一次給藥后所產(chǎn)生的毒性癥狀及其程度，出現(xiàn)和消失的時間，死亡的發(fā)生率并計算出其最大給藥量，最小致死量、半數(shù)致死量(LD50)等。由于中藥毒性常較小，單次給藥往往不能表現(xiàn)明顯的毒性作用，我國藥政部門把一日內(nèi)多次給藥觀察受試藥物毒性的實驗也稱作急性毒性實驗。急性毒性試驗的目的是推測新藥對人的急性毒性的強弱。同時，它可以為長期毒性試驗、生殖毒性試驗、致突變試驗等試驗設計提供劑量選擇依據(jù)和有關毒性信息，還可以推測受試藥物毒性發(fā)生的速度和持續(xù)時間，與半數(shù)有效量(ED50)比較判斷新藥的安全系數(shù)。因此，急性毒性試驗對了解新藥的毒性是

2、非常必要的。鑒于種種因素造成急性毒性試驗結(jié)果(癥狀和致死量)在不同實驗室內(nèi)有較大的差異，且耗費大量動物而所取得的動物毒性的信息量相對較少，因此，各國目前都在修訂急性毒性試驗的技術要求，希望能利用盡可能少的動物數(shù)量而取得有價值的信息，同樣達到急性毒性試驗的目的。第一節(jié)急性毒性試驗方法的有關問題一、動物(一)動物種動物種(或系)的差異是動物急性毒性差異的主要原因，藥酶則是毒性種差的重要原因之一。為推測新藥對人的急性毒性，某些發(fā)達國家動物急性毒性試驗要求包含非嚙齒類動物(除家兔外)在內(nèi)的兩種動物，我國對此未作出明確規(guī)定。由于中藥已在臨床長期使用，一般認為，如尤特殊情況，使用一種動物已基

3、本上達到急性毒性試驗的目的。目前雖常用的實驗動物是小鼠或大鼠。但在某些特殊情況下，例如受試物中已知含有強烈胃腸刺激物，就還應再采用非嚙齒類大動物進行實驗，否則，即使毒性較大(如巴豆)也并不能引起大、小鼠嘔吐反應。(二)動物的年齡、性別、體重急性毒性受動物的健康狀態(tài)、年齡、性別、遺傳因素、體重、藥物的吸收、分布、代謝、排泄和內(nèi)分泌激素等的影響。未成年的動物藥酶活性一般較低，對于經(jīng)代謝后減毒的藥物表現(xiàn)毒性較強。而且，年幼動物藥物代謝功能和敏感度較易發(fā)生變化，性別間的特性也尚未確立，因此，口服毒性通常使用年輕的性成熟的動物，—般小鼠6—8周齡，兩種性別，體重18-22g(同次試驗體重相

4、差不超過2g)，大鼠6—8周齡，兩種性別，體重120～150g(同次試驗體重相差不超過10g)。(三)動物數(shù)量視不同試驗而異。最小致死量或半數(shù)致死量，小動物(大鼠、小鼠)試驗組在三組以上，每組—般至少10只動物(雌雄各半)。一些國家對動物數(shù)和組數(shù)不作規(guī)定，因此，有只用3只一組經(jīng)多組試驗測得近似致死量或LD50者。大動物(犬、猴)并不—定要求得到LD50，可用少量動物采用劑量遞增的方法觀察中毒癥狀，求近似致死量即可。最大給約量試驗—般要求用小鼠或大鼠20只即可。二、試驗準備實驗應在符合GLP的實驗室內(nèi)進行，實驗樣品質(zhì)量和穩(wěn)定性應符合要求，與藥效學及臨床試驗一致。(一)樣品液的配制中

5、藥材町用濃縮煎劑或浸膏，中藥制劑可用不含輔料的提取物加水或用o．5％羧基纖維素鈉，0．5％吐溫—80，5％阿拉伯膠等混懸劑、增溶劑配成混懸液等，盡可能配成水溶液，水不溶性成分可用植物汕配成油溶、乳濁液。也有用乙醇、聚乙醇等溶劑配成樣品液者，但溶劑本身的急性毒性能干擾試驗結(jié)果，因此，急性毒性試驗報告中應對樣品液的配制方法加以詳細說明，必要時設溶劑對照組。(二)樣品液的濃度及給藥容量為了求得最低致死且或半數(shù)致死量，需要設不同劑量組，使部分組反應率在50％以上，部分組反應率在50％以下。不同劑量的設定有兩種方式，—是濃度一定不同給藥容量，另—種是容量一定不同給藥濃度，兩者各有所長。濃度

6、一定適用于某些已經(jīng)固定濃度的制劑，其有利之處是避免了滲透、粘度、溶質(zhì)顆粒的分散狀態(tài)等理化性狀不—致對毒性試驗結(jié)果的影響，因此，濃度一定也可得到較好的結(jié)果，但由于動物的投藥用量是有限的，范圍較窄，按體重給藥容量難以達到試驗要求。因此，通常采用同容量不同濃度的給藥方法，注射給藥藥液濃度應勺體液濃度等滲(至少不應低滲)，口服液不必作特殊考慮，對毒性低的中藥制劑而言，應以能保持一定流動性的最大濃度作為口服樣品液。三、給藥方法(一)動物禁食動物購入后應在實驗室觀察1星期，口服給藥前，為減少吸收差異和大容量給藥造成胃急性擴張，小鼠和大鼠至少應停食4-6h，要求一夜停食(不停水)，投藥后再停食

7、3-4h。(二)給藥途徑中藥新藥除臨床給藥途徑外，—、二類新藥還希望其他給藥途徑，水溶性藥物應同時采用靜脈給藥途徑，其他如油劑，混懸劑之類可采用皮下給藥途徑。腹腔汁射在人體極少用，中藥粗制劑成分復雜，動物毒性試驗中也盡可能少用，以避免腹腔刺激性的干擾。各給藥途徑的容量一般為小鼠0．4—0．5ml／20g(體重)，大鼠lml／l00g(體重)。小鼠口服最大容量不超過0．8ml／20g(體重)，其他途徑不超過0．5ml／20g(體重)。大鼠口服最大容量不超過2ml／l00g(體重)，