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1、植物組織培養(yǎng)實驗課件制作：沙莎實驗一培養(yǎng)基貯備液（母液）的配制目的與要求：熟悉MS培養(yǎng)基的組成，掌握貯備液的配制方法.實驗步驟：稱量分別溶解混合定容。一，MS培養(yǎng)基的組成1、大量成分→貯備液Img/LNH4NO31650KNO31900CaCl22H2O440MgSO47H2O370KH2PO4170配制20倍濃度貯備液500mL.2、微量成分→貯備液IImg/LKI0.83H3BO36.2MnSO44H2O22.3ZnSO47H2O8.6Na2MoO42H2O0.25CuSO45H2O0.025CoCl26H2O0.025配制100倍濃
2、度貯備液100mL.3、鐵→貯備液IIImg/LFeSO47H2O27.8Na2EDTA2H2O37.34、有機成分→貯備液IVmg/L肌醇100煙酸0.5鹽酸硫胺素(VB1)0.1鹽酸吡哆醇0.5甘氨酸2配制100倍濃度貯備液100mL.配制100倍濃度貯備液100mL.二，常用生長調(diào)節(jié)劑6-BA：1mg/mL(溶于少量1N鹽酸后以蒸餾水定容）。NAA:1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后以蒸餾水定容）。三、作業(yè)：（一）一般可將MS培養(yǎng)基分為哪四個部分？分別含有幾種試劑？各種試劑的濃度（mg/L）如何？（二）如需配制MS培養(yǎng)基的20×
3、的貯備液I量為500mL、100×的貯備液II、III和IV各100mL以及BA和NAA（濃度為1mg/mL）各50mL，則應(yīng)分別稱取多少量的各種試劑？注意要點有哪些？貯備液I(g)貯備液III(mg)MgSO47H2O3.70500mLFeSO47H2O278100mLNH4NO316.50Na2EDTA2H2O373CaCl22H2O4.40生長調(diào)節(jié)劑KNO319.006-BA50mg50mLKH2PO41.70NAA50mg50mL貯備液II(mg)貯備液IV(mg)KI8.3100mL肌醇1000100mLH3BO362煙酸5Mn
4、SO44H2O223鹽酸硫胺素1ZnSO47H2O86鹽酸吡哆醇5Na2MoO42H2O2.5甘氨酸20CuSO45H2O0.25稱量溶解混合定容CoCl26H2O0.25實驗二固體培養(yǎng)基的配制與滅菌一、實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)、掌握植物組織固體培養(yǎng)基的配制和滅菌方法。二、實驗步驟：稱量混合調(diào)pH值滅菌稱量：按每瓶培養(yǎng)基終體積50mL計，稱取適量的瓊脂（常用量8g/L）和蔗糖（常用量30g/L），置于大燒杯中，加蒸餾水至需配培養(yǎng)基終體積的3/4左右，（加熱）使之溶解?；旌希悍謩e加入一定量的貯備液I、II、III、IV和生長調(diào)節(jié)物質(zhì)及其它特殊補加物，
5、再加蒸餾水直至需配培養(yǎng)基的終體積。調(diào)pH值：充分混合后，在60℃水浴條件下用0.1mol/L的NaOH和0.1mol/L的HCl調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5.8。滅菌：封嚴(yán)培養(yǎng)容器口后，120℃滅菌20min后，將培養(yǎng)基取出，置于水平臺子上，在室溫下冷卻，備用。實驗三外植體材料的預(yù)處理、 消毒及接種一、實驗?zāi)康模菏煜ね庵搀w材料的預(yù)處理，掌握其消毒和接種方法。二、方法步驟：（一）對采來的植物材料進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理。除去不需要的部分，將所需部分切割至適當(dāng)大小，置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至幾小時，主要視植物材料清潔程度而定。這在污染嚴(yán)重時特別有用。（
6、二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100ml水）等浸洗上述植物材料約5min，再用自來水沖凈洗衣粉水。這是進(jìn)一步減少污染的處理。同時配制消毒液：50%次氯酸鈉溶液。（三）將接種用具、無菌水等從80℃烘箱中或直接從高壓滅菌器中取出，置于超凈工作臺上。打開超凈工作臺中的紫外燈，在進(jìn)行紫外線滅菌處理至少30min后關(guān)掉紫外燈。（四）操作人員洗手擦干，換上潔凈工作服，戴上帽子以免頭發(fā)散落以及帶來污染。坐到超凈臺前，并將裝有經(jīng)濕熱滅菌培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶、配好的消毒液、洗凈瀝干的植物材料置于超凈工作臺上，用70%酒精棉球擦手與器具外壁，即可對經(jīng)上述預(yù)處理
7、的植物材料進(jìn)行表面滅菌處理，自此以后各步均須在超凈工作臺上操作。（五）具體首先將經(jīng)上述預(yù)處理、瀝干水的植物材料放入廣口瓶或燒杯，向其中倒入新鮮配制、濃度一定并且加有一定量（通常為滅菌劑消毒液的0.5%，或每100mL消毒液滴加10~15滴）Tween-80（土溫-80）等表面活性劑的消毒液適量（液面高度超出植物材料至少0.5cm），開始計算滅菌時間。也可在使用上述滅菌劑之前，先將植物材料浸于70%乙醇滅菌10~30秒。（六）在持續(xù)滅菌時間內(nèi)定時用玻璃棒輕輕攪動，以促進(jìn)植物材料各部分與消毒液充分接觸，驅(qū)除氣泡，使滅菌徹底。在滅菌時間結(jié)束前1
8、min時，即可開始用玻璃棒等輕輕壓住植物材料將消毒液慢慢倒入廢物缸，注意勿使植物材料滑出。接著立即倒入適量無菌水，輕攪植物材料以清洗去除滅菌劑殘留。一般表面滅菌時間的計算是從倒入消毒液開始，到
