《維生素B1的測定》PPT課件

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1、維生素B1的測定——營養(yǎng)0901徐燕萍張晶熒趙莎莎趙小娟１.結(jié)構(gòu)與性質(zhì)嘧啶亞甲基　噻唑連成的季銨鹽化合物·維生素B1，又稱硫胺。分子式C12H17ClN4OS。它是人體必需的13種維生素之一，是一種水溶性維生素，屬于維生素B族，為無色結(jié)晶體，溶于水，在酸性溶液中很穩(wěn)定，在堿性溶液中不穩(wěn)定，易被氧化和受熱破壞。測定意義由于人體不能自行合成維生素B1，必須從食物中攝取。因此，人體需依賴食物提供足夠的維生素B1，測定各種食品維生素B1含量多少將對食品營養(yǎng)價值評價十分重要。如果由于食物攝入量不足，或因食物的加工、運輸、儲存、烹飪不當(dāng)，使維生素B1受到破壞或損失，都會造成維生素B1的缺乏

2、。因此，食品中的維生素B1測定對指導(dǎo)食品加工、保存、膳食營養(yǎng)配比等都有一定的意義。維生素B1是人體能量代謝，特別是糖代謝所必需的，故人體對它的需要量通常與攝取的熱量有關(guān)。當(dāng)人體的能量主要來源于糖類時，維生素B1的需要量最大。成人的建議每日攝取量是1．0～1．5mg。妊娠、哺乳期每天攝取1．5～1．6mg；在生病、生活緊張、接受手術(shù)時，要增加必要用量。來源簡介維生素B1廣泛存在于天然食物中，含量較豐富的有：動物內(nèi)臟(肝、心及腎)、肉類、豆類、花生及精細(xì)加工的谷物類。谷物類是我國人民的主食，也是維生素B1的主要來源。但過分去除麩皮與糠，維生素B1損失很多，烹調(diào)加堿可使維生素B1損失

3、增高。維生素B1的測定方法：分光光度法;HPLC法;熒光分光光度法等。分光光度法分光光度法是將維生素B1生成游離型后，與重氮化試劑對氨基苯乙酮反應(yīng)，生成紫紅色色素，移至二甲苯中測定其濃度。本法靈敏度差，只適用于食品中維生素B1含量高的試樣。高效液相色譜法把維生素B1衍生化后導(dǎo)入高效液相色譜儀，經(jīng)柱分離，通熒光檢測器測定。本法適用于體系復(fù)雜的樣品，干擾嚴(yán)重時采用此法。熒光法這里我們主要介紹熒光法參考GB/T5009.84-2003食品中硫胺素(維生素B1)的測定方法原理試樣在酸性溶液中加熱，提取維生素B1，經(jīng)蛋白分解酶處理，使維生素B1成為游離型。再經(jīng)層析柱純化，去除熒光淬滅物質(zhì)

4、，同時濃縮，用堿性鐵氰化鉀溶液將其氧化成硫色素，在紫外線下，硫色素發(fā)出熒光，再給定的條件下以及沒有其他物質(zhì)干擾時，此熒光之強(qiáng)度與硫色素量成正比即與溶液中維生素B1量成正比。操作步驟1.樣品處理樣品采集后用勻漿機(jī)打成勻漿于低溫冰箱中冷凍保存，用時將其解凍后使用。2.樣品提取3.凈化a.脫脂棉鋪于鹽基交換管的交換柱底部，再加約1g活性人造浮石使之達(dá)到交換柱的1/3高度。b.用移液管加入提取液20~60ml。c.加入約10ml熱蒸餾水沖洗交換柱，棄去洗液，重復(fù)三次。d.加入20ml50g/L酸性Kcl,收集此液于25ml刻度試管內(nèi)。涼至室溫，用250g/L酸性Kcl定容至25ml，即

5、為凈化液。做空白試驗重復(fù)上述操作，將20ml維生素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液加入鹽基交換管以代替試樣提取液，即得到標(biāo)準(zhǔn)凈化液。4.氧化將5ml試樣凈化液分別加入A、B兩個反應(yīng)瓶；同時將5ml標(biāo)準(zhǔn)凈化液分別加入A1、B1兩個反應(yīng)瓶中。Maizel-Gerson反應(yīng)瓶氧化流程反應(yīng)瓶要同時振搖，準(zhǔn)確計時90s.5、測定熒光測定條件：激發(fā)波長365nm；發(fā)射波長435nm；激發(fā)波狹縫5nm；發(fā)射波狹縫5nm。依次測定下列熒光強(qiáng)度：a.樣品空白熒光強(qiáng)度（樣品反應(yīng)瓶A）；b.標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度（標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)瓶A1）；c.樣品熒光強(qiáng)度（樣品反應(yīng)瓶B）；d.標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度（標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)瓶B1）；6.計算式中：X─

6、─樣品中硫胺素含量，mg/100g；U──樣品熒光強(qiáng)度；Ub──樣品空白熒光強(qiáng)度；S──標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度；Sb──標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度；c──硫胺素標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度，μg/ml；V──用于凈化的硫胺素標(biāo)準(zhǔn)工作液體積，ml；V1──樣品水解后定容之體積，ml；V2──樣品用于凈化的提取液體積，ml；m──樣品質(zhì)量，g；試劑作用1、蛋白分解酶：用于試樣的蛋白分解。2、鹽酸：水解樣品。3、氯化鉀：該熱溶液可從鹽基交換管中的浮石里解析出維生素B1。4、鐵氰化鉀堿性溶液：氧化游離的維生素B1，生成硫色素。5、正丁醇：溶解紫外熒光物質(zhì)——硫色素試劑。注意事項1、加熱酸性Kcl時不能使其沸騰，熱Kcl

7、濾速較快，而不沸則是使其不至因過飽和而在洗滌中結(jié)晶析出阻塞交換柱。2、紫外線會分解破壞維生素B1，所以維生素B1形成后要快速測定。3、氧化中加鐵氰化鉀是整個實驗的關(guān)鍵，對每個樣品所加試劑的次序、快慢、振搖時間等都必須盡量一致，尤其是用正丁醇提取硫色素時必須保證準(zhǔn)確振搖90s。謝謝！