《實(shí)驗(yàn)沉淀反應(yīng)》PPT課件

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1、實(shí)驗(yàn)二沉淀反應(yīng)定義：可溶性Ag+相應(yīng)Ab形成肉眼可見的沉淀物質(zhì)（Ag-Ab復(fù)合物）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容對(duì)流免疫電泳雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)試劑和器材雙擴(kuò)實(shí)驗(yàn)：標(biāo)本1、標(biāo)本2、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、Ab（抗白蛋白）、1.2%的瓊脂、濕盒、37度溫箱等對(duì)流實(shí)驗(yàn)：對(duì)流Ag、Ab（抗白蛋白）、pH8.6的巴比妥緩沖液、1.2%的瓊脂、電泳儀、電泳槽、加樣器雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)原理：定性試驗(yàn)。將可溶性抗原與相應(yīng)抗體分別加入瓊脂板上相對(duì)應(yīng)的孔內(nèi)，抗原抗體從孔內(nèi)向四周擴(kuò)散，在兩者對(duì)應(yīng)比例適宜處形成沉淀線。意義：可用已知抗原（抗體）來檢測(cè)未知的抗體（抗原），同時(shí)檢測(cè)抗原抗體的純度。

2、臨床上常用來檢測(cè)甲胎蛋白（AFP），作為原發(fā)性肝癌等的輔助診斷。實(shí)驗(yàn)方法（1）制板：4ml/塊（2）打孔：孔徑3mm，孔間距5mm。（3）加樣（各10ul）：：標(biāo)本1：標(biāo)本2：陽性對(duì)照：Ab（4）擴(kuò)散：置濕盒37°C、24小時(shí)觀察結(jié)果。231123實(shí)驗(yàn)方法（1）制板：4ml/塊（2）打孔：孔徑3mm，孔間距5mm。（3）加樣（各10ul）：：標(biāo)本1:標(biāo)本2：陰性對(duì)照：陽性對(duì)照：Ab（4）擴(kuò)散：置濕盒37°C、24小時(shí)觀察結(jié)果。561426423153結(jié)果判斷1.在陽性對(duì)照孔與中間的抗體孔之間出現(xiàn)一條或多條白色沉淀線（一對(duì)抗原抗體系統(tǒng)即可出現(xiàn)

3、一條沉淀線，如有多對(duì)抗原抗體可出現(xiàn)多條沉淀線）。2.觀察標(biāo)本孔與中間的抗體孔之間有無出現(xiàn)沉淀線，有即為陽性，無即為陰性。對(duì)流免疫電泳原理：利用電場(chǎng)的作用加強(qiáng)和加快雙向擴(kuò)散的一種方法。在pH8.6的堿性緩沖液瓊脂中進(jìn)行電泳，帶有較多負(fù)電荷的Ag泳向陽極，而Ab球蛋白等電點(diǎn)偏高（約為6--7），在pH8.6時(shí)帶負(fù)電荷較少，加上分子量較大，泳動(dòng)慢，受電滲（指電場(chǎng)中液體對(duì)固體支持物的相對(duì)移動(dòng)）干擾后向陰極倒退，這樣抗原抗體作相對(duì)運(yùn)動(dòng)，在較短時(shí)間內(nèi)即可相遇，在孔間兩者分子比例合適的地方形成沉淀線。實(shí)驗(yàn)方法（1）制板：吸取融化的熱瓊脂4ml，均勻加在平

4、坦的載玻片上，待冷卻后再移動(dòng)。（2）打孔：孔徑3mm，孔間距5mm（3）加樣（10ul）：1.Ag2.Ab（4）電泳:穩(wěn)壓100V,30min。（5）結(jié)果觀察：在Ag和Ab之間出現(xiàn)一條白色沉淀線。+12結(jié)果判斷1.有沉淀線：+無沉淀線：-2.沉淀線的位置與Ag、Ab分子電荷情況有關(guān)，也與Ag、Ab比例有關(guān)。3.特點(diǎn)：優(yōu)：操作簡(jiǎn)便，觀察結(jié)果快，敏感度比雙擴(kuò)高8-16倍。缺：分辨率差，當(dāng)有多種Ag、Ab系統(tǒng)存在時(shí)，形成的沉淀線位置易重疊，難以分辨，所以用此目的時(shí)，不如雙擴(kuò)。意義：對(duì)流免疫電泳主要用于檢測(cè)標(biāo)本中的抗原如AFP、HBsAg等。本法較

5、雙向瓊脂擴(kuò)散時(shí)間大為縮短（一般只需30分鐘到1小時(shí)），且靈敏度比雙擴(kuò)高約數(shù)十倍。注意事項(xiàng)1、澆瓊脂板時(shí)注意動(dòng)作要迅速，瓊脂不要溢出玻片，成品瓊脂板平整無氣泡，打孔時(shí)，不要將瓊脂劃破；2、加樣時(shí)，不要溢出孔外；3、加樣用的槍頭不要混用。