毛細(xì)管電泳和超臨界流體色譜法

《毛細(xì)管電泳和超臨界流體色譜法》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、第六章毛細(xì)管電泳和超臨界流體色譜法毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳的概述；毛細(xì)管電泳的理論；毛細(xì)管電泳的儀器系統(tǒng)；毛細(xì)管電泳的應(yīng)用。第六章毛細(xì)管電泳和超臨界流體色譜法超臨界流體色譜法；超臨界流體色譜法的概述；超臨界流體色譜法的速率理論；超臨界流體色譜法的儀器；超臨界流體色譜法的應(yīng)用。第一節(jié)毛細(xì)管電泳一、概述1、毛細(xì)管電泳(Capillaryelectrophoresis,CE)的歷史：1981年Jorgenson&Lukacs用75μm的毛細(xì)管柱分離了丹酰化氨基酸，40萬(wàn)理論塔板數(shù)/m。2、電泳是指電介質(zhì)中帶電粒子在電場(chǎng)作用下以不同速度向電

2、荷相反方向遷移的現(xiàn)象，利用這種現(xiàn)象對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離分析的方法稱(chēng)之電泳法。第一節(jié)毛細(xì)管電泳HPEC高效毛細(xì)管電泳第一節(jié)毛細(xì)管電泳四色熒光標(biāo)記－毛細(xì)管電泳DNA測(cè)序第一節(jié)毛細(xì)管電泳3、特點(diǎn)：1）柱效高，可達(dá)105～106理論塔板數(shù)/m；高效2）分離速度快；快速3）幾乎不消耗溶劑，樣品用量少，僅為幾十納升，儀器成本也低；低耗4）選擇性大，可根據(jù)不同的分子性質(zhì)對(duì)生物大分子、藥物等極廣泛的分離對(duì)象進(jìn)行有效的分離。靈敏第一節(jié)毛細(xì)管電泳4、分類(lèi)名稱(chēng)縮寫(xiě)管內(nèi)填充物說(shuō)明毛細(xì)管區(qū)帶電泳CZEpH緩沖的自由電解質(zhì)溶液，可含有一定功能的添加劑。屬自由溶液

3、電泳型，但可通過(guò)加添加劑引入色譜機(jī)理。膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜MECCCZE載體＋帶電荷的膠束CZE擴(kuò)展的色譜型微乳液電動(dòng)毛細(xì)管色譜MEECC由緩沖液、不溶于水的有機(jī)溶劑和乳化劑構(gòu)成的微乳液。CZE擴(kuò)展的色譜型毛細(xì)管凝膠電泳CGE各種電泳用凝膠或其他篩分介質(zhì)。屬非自由溶液電泳，含有“分子篩”效應(yīng)。毛細(xì)管等電聚焦CIEF建立pH梯度的兩性電解質(zhì)按等電點(diǎn)分離，屬電泳型，要求完全抑制電滲流動(dòng)。毛細(xì)管電動(dòng)色譜CECCEZ載體＋液相色譜固定相屬非自由溶液色譜型非水毛細(xì)管電泳NACE含有電解質(zhì)的非水體系屬自由溶液電泳型第一節(jié)毛細(xì)管電泳二、毛細(xì)管電

4、泳的理論基礎(chǔ)1、電泳和電泳淌度E為電場(chǎng)強(qiáng)度；mep為溶質(zhì)的淌度（溶質(zhì)在給予緩沖液中單位時(shí)間和單位電場(chǎng)強(qiáng)度下移動(dòng)的距離）。e和h分別為介質(zhì)的介電常數(shù)和黏度，zi是粒子的Zeta電勢(shì)，Zeta電勢(shì)和粒子的表面電荷成正比，和粒子分子量成反比。第一節(jié)毛細(xì)管電泳2、電滲和電滲率mos為電滲率；uos為電滲速度；zos為管壁的Zeta電勢(shì)3、表觀淌度和權(quán)均淌度uap為表觀遷移速度，分離后出峰次序?yàn)椋赫x子>中性分子>負(fù)離子。第一節(jié)毛細(xì)管電泳kp為容量因子；np和ns分別為樣品在P相（在毛細(xì)管中引入另一相，如膠束、高分子團(tuán)等準(zhǔn)固定相或色譜固定

5、相等，稱(chēng)為P相）和溶劑中的分子數(shù)；mp為P相的表觀淌度。第一節(jié)毛細(xì)管電泳4、分離效率與譜帶展寬柱效和塔板高度，Ld為進(jìn)樣口到檢測(cè)器的距離。毛細(xì)管電泳只有縱向擴(kuò)散項(xiàng)，時(shí)電驅(qū)動(dòng)的扁平流型系統(tǒng)自熱：擴(kuò)散與吸附：E為電場(chǎng)強(qiáng)度，kV/m；c為介質(zhì)濃度，mol/l；d為管徑，mm。第一節(jié)毛細(xì)管電泳5、分離度：將淌度相近的組分分開(kāi)的能力。與外加電壓V；有效柱長(zhǎng)與總長(zhǎng)度之比（Ld/L）；電泳有效淌度差（Δmef）；電滲淌度（mos）有關(guān)。第一節(jié)毛細(xì)管電泳三、毛細(xì)管電泳儀器設(shè)備1、高壓電源2、毛細(xì)管柱3、進(jìn)樣（電動(dòng)/壓力/擴(kuò)散）4、檢測(cè)器四、應(yīng)用

6、蛋白質(zhì)第二節(jié)超臨界流體色譜法一、概述1958年，JamesLovelock首次提出設(shè)想。1962年，Klesper第一篇關(guān)于用超臨界流體二氯二氟甲烷和二氯二氟甲烷作的流動(dòng)相，分離鎳卟啉異構(gòu)體。1966年正戊烷為流動(dòng)相，分析多環(huán)芳烴、染料和環(huán)氧樹(shù)脂。1968年，Gidding等以CO2和氨為流動(dòng)相，分析核苷、糖、氨基酸、甾醇、類(lèi)固醇、類(lèi)胡蘿卜素等。1981年Novotay&Lee毛細(xì)管柱超臨界流體色譜（Supercriticalfluidchromatography,SFC）。才完善技術(shù)。1、超臨界流體（Supercritical

7、fluid,SF）傳質(zhì)阻力小，可得到快速高效的分離；在較低溫度下，可分析熱不穩(wěn)定性和分子量大的物質(zhì)，同時(shí)還能增加柱子的選擇性；流體的密度可改變流體的性質(zhì)。特點(diǎn)：1）與GC比，溶解度增大，分離難揮發(fā)樣品效果好。2）與HPLC相比，擴(kuò)散系數(shù)大，分離度增加。3）黏度低于液體，柱壓降低，每米理論板數(shù)提高。4）密度：溶解度、擴(kuò)散系數(shù)和黏度都是密度的函數(shù)，可改變密度來(lái)實(shí)現(xiàn)，如程序升壓等。第二節(jié)超臨界流體色譜法第二節(jié)超臨界流體色譜法2、SFC與GC、LC的比較SFCGCLC流動(dòng)相選擇性流動(dòng)相和固定相的函數(shù)固定相的函數(shù)流動(dòng)相的函數(shù)總柱效最高，毛

8、細(xì)管SFC為106最低其次分析時(shí)間分析時(shí)間短分析時(shí)間較長(zhǎng)分析時(shí)間短工作溫度室溫至200℃精確的高溫室溫檢測(cè)器可接各種類(lèi)型只接FID,ECD,FPD,TID,PID,TCD等不能用FID，不能直接接入MS第二節(jié)超臨界流體色譜法2、超臨界流體色譜法的速率理論1）相對(duì)