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《流動相對色譜峰形及保留值的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、流動相對色譜峰形及保留值的影響pH應用反相高效液相色譜進行分析測定時，常常采用離子抑制法即向含水流動相中加入酸、堿或緩沖溶液等改性劑，以使流動相的pH值控制一定數(shù)值，抑制溶質(zhì)的離子化，減少譜帶拖尾、改善峰形，以提高分離的選擇性。例如在分析有機弱酸時，常向流動相中加入磷酸(或乙酸、三氯乙酸、甲酸、硫酸)，就可抑制溶質(zhì)的離子化，獲對稱的色譜峰。對于弱堿性樣品，向流動相中加入三乙胺，也可達到相同的效果。方法建立時最好選用pH微小改變不影響分離的流動相，pH值的較大變化往往會對分析結果產(chǎn)生很大影響，因此流動相pH值的調(diào)節(jié)是分析過程中至關重要
2、的一個環(huán)節(jié)。將常用藥物按它們對流動相pH值變化的保留值函數(shù)特征分成堿性、酸性和中性三類,有利于從宏觀上把握藥物的色譜行為趨勢,可以有預見性地規(guī)劃分離條件的選擇,減少不必要的實驗條件和實驗次數(shù),對內(nèi)標物的選擇及分離度的改善和保留值的增減趨勢均可作出事先的判斷,這對在藥物分析實踐中有指導意義。式中k′p、k′p+1是pH值分別為p、p+1時的容量因子,n為pH2-5時的pH值,Sp、Spn為流動相pH值增加±1時藥物容量因子的響應系數(shù)和平均響應系數(shù)。定義:Spn>0.1,物質(zhì)為堿性,保留值隨pH值增加而增加;Spn<-0.1,物質(zhì)為酸性
3、,保留值隨pH值增加而減少;-0.1≤Spn≤0.1,物質(zhì)保留值幾乎不受流動相pH值變化的影響,被定義為中性?；瘜W結構是藥物理化特性、色譜特征的物質(zhì)基礎,不同結構的藥物表現(xiàn)出不同的色譜行為。堿性藥物均含有未參予共扼體系的氮原子,酸性藥物含羧基或磺酸基團,中性藥物不含酸堿基團,如甾體類和酰胺類酸性煙酸阿魏酸卡托普利蔡普生布洛芬對氨基水楊酸甘草酸水楊酸堿性普羅帕酮法莫替丁阿替洛爾利多卡因苯丙哌林環(huán)丙沙星維拉帕米氯丙嗪中性茶堿維生素c非那西丁卡馬西平硝苯地平地西泮阿昔洛維有的藥物在結構上同時含有酸性、堿性基團,卻表現(xiàn)出不同色譜行為。如環(huán)丙
4、氟呱酸和氨甲苯酸呈堿性,丙谷胺為酸性,而氟呱酸卻類似中性。磺胺類藥物多為中性或呈弱堿性。一般來說,堿性藥物的保留值對pH值的敏感性差異較大,保留值大的藥物對pH值的敏感性較大,堿性藥物對pH值敏感性在pH>4時顯著增加,如酮康哇和益康哇。所以當分離堿性或酸性藥物采用的流動相pH值在4左右時,要特別給予注意,以免影響分離度和峰序的改變,如環(huán)丙沙星與氟哌啶,地卡因與普羅帕酮等在一之間發(fā)生峰序倒置。如果水未冷卻到室溫就調(diào)節(jié)流動相pH值，會造成流動相pH值的較大偏離，從而導致整個色譜分析實驗的偏差甚至失敗。pH>8,硅膠基質(zhì)的溶解pH<2,
5、鍵合相基團脫落調(diào)節(jié)水相離子強度在反相高效液相色譜過程中,流動相的離子強度可顯著影響可解離的化合物的色譜峰形。過載（overloading），峰形接近直角三角形。隨著進樣量的增加,色譜區(qū)帶中高濃度的前半部的保留時間減少,但色譜區(qū)帶均在同一時刻結束,色譜峰的拖尾因子及峰寬均顯著增加,同時被測物與有關物質(zhì)間的分離也隨之變差。選擇合適的緩沖鹽并適當?shù)卦黾恿鲃酉嗟碾x子強度即可顯著改善色譜峰形,色譜峰的拖尾因子及峰寬均隨之降低,同時被測物與有關物質(zhì)間也更加易于分離。overloading以硅膠為基質(zhì)的反相鍵合相填料的表面實際上是不均勻的,固定相
6、中不可避免地含有少量高能量位點(sites),這些高能量位點易被可解離的(甚至中性的)化合物所過載。解離的化合物在固定相表面的相互排斥作用以及較難滲透進入疏水性的固定相中也是可能的原因，采用反相高效液相分離可解離的(尤其是堿性的)化合物時色譜柱易于過載,甚至低達10ng的堿性化合物也可使常規(guī)色譜柱的表觀柱效明顯降低;減少進樣量則可改善色譜峰形并使表觀柱效顯著增加;過載效應可隨著流動相的離子強度的增加而逐漸減弱。分離可解離的化合物時,流動相中添加緩沖鹽并非僅僅用于穩(wěn)定流動相的pH值,緩沖鹽、甚至簡單的中性鹽（如氯化鈉）的反離子還可與離
7、子化的被測物通過相互間的締合作用形成疏水性較強的中性離子對復合物;在低離子強度的緩沖液中,吸附在固定相表面的離子化的被測物分子的極性基團相互之間存在靜電排斥效應,這使得色譜柱的飽和容量顯著降低;隨著緩沖液濃度(離子強度)的增加,中性離子對復合物的濃度相應增加,固定相表面離子化的吸附物之間的相互排斥作用隨之減弱,導致色譜柱的飽和容量、尤其是填料上的低能量位點的飽和容量以及平衡常數(shù)增加;鹽一類的流動相添加劑可破壞離子化的被測物在流動相中的溶劑化-去溶劑化平衡,產(chǎn)生所謂的促溶效應(chaotropiceffect),被測物與鹽相互作用,離
8、子化的被測物相互間的排斥作用減弱,從而顯著地影響被測物在固定相上的吸附行為;在制備色譜系統(tǒng)中或被測物濃度較高時,流動相中應含有足量的緩沖鹽以改善色譜峰形和分離效果。色譜柱的飽和容量可隨緩沖鹽的單價陽離子(如Na+、NH4+、K+、Cs
