《煙草青枯病》ppt課件

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1、煙草青枯病黃俊斌教授劉海龍黎妍妍研究背景煙草是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，是煙區(qū)人民脫貧致富的主要經(jīng)濟(jì)來源，但是煙草的病害發(fā)生嚴(yán)重，尤其是煙草青枯病，幾乎分布于世界上所有烤煙種植區(qū)。煙草青枯病是由茄科雷爾氏菌（Ralstoniasolanacearum）引起,1864年在印度尼西亞首先報(bào)道。該病在我國長江流域及其以南煙區(qū)普遍發(fā)生，其中以廣東、福建、臺(tái)灣、湖南、湖北、江西、廣西東部、安徽南部、四川及貴州局部煙區(qū)為害嚴(yán)重，個(gè)別年份常常暴發(fā)流行，造成毀滅性損失。一、癥狀正常萎蔫典型癥狀是葉片萎蔫，部分葉片變黃，莖

2、上出現(xiàn)長形黑褐色條斑，有的條斑擴(kuò)展到病株頂部，根部變黑腐爛?？菸o干變褐葉肉病變莖干變褐研究內(nèi)容二、病原菌的分離和鑒定1.病原菌的分離采用稀釋劃線分離法。將煙草病株基部的莖桿表面用清水洗凈晾干，75％的酒精表面消毒，在含有無菌水的培養(yǎng)皿中研磨病組織。用移菌環(huán)蘸取少量菌液在TTC培養(yǎng)基（青枯菌選擇培養(yǎng)基）上劃線，30℃培養(yǎng)48h。TTC平板培養(yǎng)48h后青枯菌菌株的菌落形態(tài)TTC培養(yǎng)基：NA培養(yǎng)基中加入三苯基四氮唑（TTC）.煙草青枯菌分離菌株來源菌株煙草品種地理來源菌株煙草品種地理來源XE1-1云煙8

3、7宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)XF3-1畢納1號(hào)咸豐縣忠堡鎮(zhèn)XE1-2云煙87宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)XF3-2畢納1號(hào)咸豐縣忠堡鎮(zhèn)XE2-1畢納1號(hào)宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS1-1云煙87巴東縣大支坪鎮(zhèn)XE2-3畢納1號(hào)宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS1-2云煙87巴東縣大支坪鎮(zhèn)XE2-4畢納1號(hào)宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS1-3云煙87巴東縣大支坪鎮(zhèn)XE3-2云煙87宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS1-4云煙87巴東縣大支坪鎮(zhèn)XE3-3云煙87宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS2-1云煙87恩施市盛家壩鄉(xiāng)XE3-4云煙87宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS2-2云煙87恩施市盛家壩鄉(xiāng)XE4-1云煙87宣恩縣曉關(guān)

4、鎮(zhèn)RS3-2云煙87恩施市三岔鄉(xiāng)XE4-2云煙87宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS3-3云煙87恩施市三岔鄉(xiāng)XE5-1云煙87宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS4-1云煙87恩施市盛家壩鄉(xiāng)XE5-2云煙87宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS4-2云煙87恩施市盛家壩鄉(xiāng)XE5-3云煙87宣恩縣曉關(guān)鎮(zhèn)RS6-1云煙87恩施市龍鳳鎮(zhèn)LC1-2云煙87利川市柏楊壩鎮(zhèn)RS6-2云煙87恩施市龍鳳鎮(zhèn)LC1-4云煙87利川市柏楊壩鎮(zhèn)RS6-3云煙87恩施市龍鳳鎮(zhèn)LC1-5云煙87利川市柏楊壩鎮(zhèn)RS5-1云煙87來鳳縣舊司鄉(xiāng)LC1-6云煙87利川市柏楊壩鎮(zhèn)RS5-2

5、云煙87來鳳縣舊司鄉(xiāng)LC2-1云煙87利川市柏楊壩鎮(zhèn)RS5-3云煙87來鳳縣舊司鄉(xiāng)LC2-2云煙87利川市柏楊壩鎮(zhèn)RS5-4云煙87來鳳縣舊司鄉(xiāng)LC2-3云煙87利川市柏楊壩鎮(zhèn)RS7-1云煙87鶴峰縣燕子鄉(xiāng)LC2-4云煙87利川市柏楊壩鎮(zhèn)RS7-2云煙87鶴峰縣燕子鄉(xiāng)XF1-1畢納1號(hào)咸豐縣忠堡鎮(zhèn)RS7-3云煙87鶴峰縣燕子鄉(xiāng)XF1-2畢納1號(hào)咸豐縣忠堡鎮(zhèn)RS7-4云煙87鶴峰縣燕子鄉(xiāng)XF1-3畢納1號(hào)咸豐縣忠堡鎮(zhèn)RS8-1鄂煙1號(hào)建始縣高坪鎮(zhèn)XF2-1畢納1號(hào)咸豐縣忠堡鎮(zhèn)RS8-2鄂煙1號(hào)建始縣高

6、坪鎮(zhèn)XF2-2畢納1號(hào)咸豐縣忠堡鎮(zhèn)RS8-3鄂煙1號(hào)建始縣高坪鎮(zhèn)XF2-3畢納1號(hào)咸豐縣忠堡鎮(zhèn)RS8-4鄂煙1號(hào)建始縣高坪鎮(zhèn)2病原菌的純化和保存從TTC培養(yǎng)基上挑取呈不規(guī)則圓形，中心淡粉紅色，周圍白邊較寬，流動(dòng)性強(qiáng)的單菌落進(jìn)行純化，2-3次后，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于滅菌水中20℃保存。3青枯菌的分子鑒定通過常規(guī)PCR，利用青枯菌種的特異性引物759／760，對(duì)分離獲得的菌株進(jìn)行分子鑒定，根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果來確定是否為青枯菌。引物序列：759：GTCGCCGTCAACTCACTTTCC760：GTCGCCG

7、TCAGCAATGCGGAATCGPCR擴(kuò)增采用25μL反應(yīng)體系，其中10×PCRbuffer2.5μL，Taq酶2U，MgCl21.5mM，dNTPs200μM，引物759和760各1μL，DNA5μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃2min；94℃20s，3068℃30s，72℃30s；72℃延伸10min。3.青枯菌的分子鑒定結(jié)果擴(kuò)增結(jié)果表明：所有分離獲得的供試青枯菌菌株均可擴(kuò)增得到280bp左右的特異性片段。分離菌株的特異性PCR鑒定結(jié)果注：1-22、24-46分離的煙草青枯菌；23：陰性對(duì)照；M：10

8、00bpMarker（自上而下片段大小分別為：1000bp，700bp，500bp，400bp，300bp，200bp，100bp）280bp280bp280bp三、煙草青枯菌菌系分化研究1.青枯菌生理小種鑒定供試菌株：從湖北恩施地區(qū)煙草青枯病病株上分離的54個(gè)青枯菌菌株。鑒別寄主：煙草、番茄、茄子、馬鈴薯、花生和辣椒接種方法：1mL細(xì)菌懸浮液（濃度為108cfu／mL），注射到5-7葉期的寄主莖基部。培養(yǎng)條件：溫度30℃，相對(duì)濕度80%以上。小種劃分：接種7天后，調(diào)