《熒光紅外酶標(biāo)儀》ppt課件

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1、§16.1光學(xué)儀器簡(jiǎn)介§16.2酶標(biāo)儀的原理應(yīng)用及操作§16.3熒光光譜儀原理應(yīng)用及操作§16.4紅外光譜儀原理應(yīng)用及操作§16酶標(biāo)儀、熒光光譜儀、紅外光譜儀的使用§16.1光學(xué)儀器簡(jiǎn)介一、光學(xué)知識(shí)回顧1．可見光的顏色和互補(bǔ)色：在可見光范圍內(nèi)，不同波長(zhǎng)的光的顏色是不同的。平常所見的白光（日光、白熾燈光等）是一種復(fù)合光，它是由各種顏色的光按一定比例混合而得的。利用棱鏡等分光器可將它分解成紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等不同顏色的單色光。白光除了可由所有波長(zhǎng)的可見光復(fù)合得到外，還可由適當(dāng)?shù)膬煞N顏色的光按一定比例復(fù)合得到。能復(fù)合成白光的兩種顏色的光叫互補(bǔ)色光。?/nm顏色互補(bǔ)光400-450紫黃綠4

2、50-480藍(lán)黃480-490綠藍(lán)橙490-500藍(lán)綠紅500-560綠紅紫560-580黃綠紫580-610黃藍(lán)610-650橙綠藍(lán)650-760紅藍(lán)綠完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光2．物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系：當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時(shí)，如果物質(zhì)對(duì)白光中某種顏色的光產(chǎn)生了選擇性的吸收，則物質(zhì)就會(huì)顯示出一定的顏色。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補(bǔ)色。物質(zhì)顏色吸收光物質(zhì)顏色吸收光顏色波長(zhǎng)范圍（nm）顏色波長(zhǎng)范圍(nm)黃綠紫400～450紫綠560～580黃藍(lán)450～480藍(lán)黃580～600橙綠藍(lán)480～490綠藍(lán)橙600～650紅藍(lán)綠490～500藍(lán)綠紅650～760紫紅綠

3、500～560三原色RGB紅綠藍(lán)印刷的三原色是RGB的互補(bǔ)色yellow黃，cyan青，magenta品紅（或者叫洋紅、紅紫光分析法：基于電磁輻射能量與待測(cè)物質(zhì)相互作用后所產(chǎn)生的輻射信號(hào)與物質(zhì)組成及結(jié)構(gòu)關(guān)系所建立起來的分析方法；電磁輻射范圍：射線～無線電波所有范圍；相互作用方式：發(fā)射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射等；光分析法在研究物質(zhì)組成、結(jié)構(gòu)表征、表面分析等方面具有其他方法不可取代的地位；二、光分析法及其特點(diǎn)三個(gè)基本過程：（1）能源提供能量；（2）能量與被測(cè)物之間的相互作用；（3）產(chǎn)生信號(hào)。基本特點(diǎn)：（1）所有光分析法均包含三個(gè)基本過程；（2）選擇性測(cè)量，不涉及混合物分離（不同于色

4、譜分析）；（3）涉及大量光學(xué)元器件。三、電磁輻射的基本性質(zhì)1.電磁輻射的波動(dòng)性散射折射與反射衍射干涉偏振波長(zhǎng)—?cm、μm、nm、A頻率—υHzsec-1波數(shù)—σcm-1傳播速度—?cm/sec2.電磁輻射的粒子性3.普朗克(Planch)公式光電效應(yīng)康普敦效應(yīng)黑體輻射一).電磁輻射的波粒二象性E--光子的能量J,焦耳υ---光子的頻率Hz,赫茲?---光子的波長(zhǎng)cmC---光速2.9979?1010cm.s-1h---Planch常數(shù)6.6256?10-34J.s焦耳.秒E=hν=hc/λc=λν=ν/σ吸收發(fā)射C=299,792,458米/秒波譜區(qū)?-射線波長(zhǎng)5~140pm躍遷類型核能

5、級(jí)X-射線遠(yuǎn)紫外光10-3~10nm10~200nm原子內(nèi)層電子莫斯鮑爾光譜法:?-射線?原子核??-射線吸收X-射線吸收光譜法:X-射線/放射源?原子內(nèi)層電子（n>10)?X-射線吸收X-熒光光譜法:X-射線?原子內(nèi)層電子?特征X-射線發(fā)射遠(yuǎn)紫外光----真空紫外區(qū)。此部分光譜會(huì)被空氣吸收近紫外光可見光200~400nm400~750nm原子外層電子/分子成鍵電子原子光譜：原子發(fā)射光譜、原子吸收光譜、原子熒光光譜分子光譜：紫外-可見吸收光譜、分子熒光/磷光光譜、化學(xué)發(fā)光二)光學(xué)分析法波譜波譜區(qū)近紅外光中紅外光波長(zhǎng)0.75~2.5?m2.5~50?m躍遷類型分子振動(dòng)遠(yuǎn)紅外光微波射頻50~1

6、990?m0.1~100cm1~100m分子轉(zhuǎn)動(dòng)電子、核自旋近紅外光譜區(qū):配位化學(xué)的研究對(duì)象紅外吸收光譜法:紅外光?分子?吸收遠(yuǎn)紅外光譜區(qū)電子自旋共振波譜法:微波?分子未成對(duì)電子?吸收核磁共振波譜法:射頻?原子核自旋?吸收三)、本章儀器所用的光波波譜區(qū)近紫外光可見光近紅外光中紅外光遠(yuǎn)紅外光波長(zhǎng)200~400nm400~750nm0.75~2.5?m2.5~50?m50~1990?m躍遷類型原子外層電子分子成鍵電子分子振動(dòng)分子轉(zhuǎn)動(dòng)酶標(biāo)儀、熒光分光光度計(jì)紅外分光光度計(jì)?-射線5~140pmX-射線10-3~10nm遠(yuǎn)紫外光10~200nm微波0.1~100cm，射頻1~100m（核磁共振）2.

7、電磁輻射的吸收與發(fā)射A.原子光譜線光譜Linespectrah?i半寬度10-2~10-5原子吸收光譜原子發(fā)射光譜E2E0E1E3波長(zhǎng)λ=hc/△E=hc/(E1-E0)=hν1.物質(zhì)的能態(tài)原子、離子分子△E=E1-E0=hc/λB.分子光譜帶光譜Bandspectra有機(jī)、無機(jī)分子半寬度20~100nm分子吸收光譜分子發(fā)射光譜h?i波長(zhǎng)/nmA(T)波長(zhǎng)/nmI半寬度20~100nmE2E1E0△E=△E電子+△E振動(dòng)