蛋白質(zhì)含量的測(cè)定測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法`

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1、蛋白質(zhì)含量的測(cè)定掌握蛋白質(zhì)含量測(cè)定的原理和方法學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制熟練使用分光光度計(jì)實(shí)驗(yàn)?zāi)康臏y(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法較多基本上都是根據(jù)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性建立起來(lái)的。實(shí)驗(yàn)原理二、比色法：利用蛋白質(zhì)與不同試劑的呈色反應(yīng)，測(cè)定蛋白質(zhì)的含量，如雙縮尿法和酚試劑法（lowry’smethod）。三、紫外分光光度法：利用蛋白質(zhì)對(duì)280nm紫外光有最大的吸光度而采用一、凱氏定氮法：根據(jù)蛋白質(zhì)的含氮量來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的含量公式:每g樣品中含氮克數(shù)×6.25×100蛋白質(zhì)呈色試劑:酚試劑磷鉬酸--鎢酸的混和酸半胱氨酸、酪氨酸、色

2、氨酸組氨酸還原型混和酸(蘭色)蛋白質(zhì)肽鍵堿性烯醇化銅離子在pH10條件下螯合在肽鍵結(jié)構(gòu)中從而使電子轉(zhuǎn)移到混和酸的顯色劑上，增強(qiáng)了酚試劑對(duì)蛋白質(zhì)的敏感性。蛋白質(zhì)與酚試劑呈色深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，利用蛋白質(zhì)的濃度與呈色的關(guān)系，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，來(lái)測(cè)定樣品中的蛋白質(zhì)含量。用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白溶液（濃度為50mg%）配成一系列不同濃度的蛋白質(zhì)溶液。取七支試管，編號(hào)，按下表操作實(shí)驗(yàn)操作編號(hào)1234567蛋白質(zhì)含量（μg）標(biāo)準(zhǔn)液(ml)生理鹽水ml)試劑A(ml)50100150200250空白0.10.20.30.40.5/0.5（

3、樣品）0.90.80.70.60.51.00.50.90.90.90.90.90.90.9混勻，置50℃水浴十分鐘，冷卻至室溫試劑B0.10.10.10.10.10.10.1室溫放置十分鐘試劑C(混勻)3.03.03.03.03.03.03.0冷卻后在波長(zhǎng)650nm條件下比色,測(cè)定其光密度值。以空白管調(diào)零.50℃水浴10分鐘,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制以蛋白質(zhì)的含量（μg）為橫坐標(biāo)，光密度值（OD）為縱坐標(biāo)，繪制出蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)樣品中的OD650,從蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中找到樣品中蛋白質(zhì)的μg數(shù)。計(jì)算每100ml血清中所含蛋白質(zhì)的克數(shù)為

4、：g%=樣品中蛋白質(zhì)含量（μg數(shù)）×1/0.5×100×10-6×500注意事項(xiàng)測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度最好在25~100μg之間，故血清稀釋倍數(shù)一般為200~500。各管加酚試劑應(yīng)快，必須立即混勻，否則就會(huì)出現(xiàn)渾濁。2、繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：要求規(guī)范作圖鉛筆作圖、橫、縱坐標(biāo)名稱(chēng)及單位日期、作者、曲線(xiàn)名稱(chēng)曲線(xiàn)上體現(xiàn)出待測(cè)樣品的OD值及ug數(shù)。3、計(jì)算：100ml血清中的蛋白質(zhì)含量。要求：寫(xiě)出公式、代入數(shù)據(jù)、寫(xiě)出結(jié)果。1、原始數(shù)據(jù):各管的OD值實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)誤差產(chǎn)生的原因總結(jié)該方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)缺點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)討論