TriZOL小量法制備RNA

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1、Mini-preTotalRNAwithTriZOL幼嫩組織若干，液氮研磨，分裝成＜100mg小份至預(yù)冷E.P.管100mg樣品加入1mlTriZOL抽提幾分鐘（顛倒混勻）12,000g、2~8℃離心10min吸取上清（含RNA），轉(zhuǎn)移至新的1.5mlE.P.管中HomogenizationPhaseSeparation此前可于―70℃放置1月再抽提15~30℃放置5min加0.2ml(1/5VTriZOL)氯仿，充分抽提15sec.15-30℃放置2~3min形成上層無色水相、中間相和下層有機(jī)相≤12,000g、2~8℃離心15min中間相和有機(jī)相可用于DNA和蛋白質(zhì)抽提吸取上

2、清，轉(zhuǎn)移至新的1.5mlE.P.管中加0.5ml(1/2VTriZOL)異丙醇15-30℃放置10minRNAPrecipitationRNARedissolvingRNAWash≤12,000g、2~8℃離心10min小心棄去上清，得膠體狀RNA在75%乙醇中，RNA沉淀可于2~8℃放置1周、―5℃~70℃放置1年加1~1.5ml(≥1VTriZOL)75%乙醇，渦旋混勻≤7,500g、2~8℃離心5min小心棄去上清，留下膠體狀RNA過干會使RNA難以溶解干燥5~10min溶于RNase-free水中，槍頭打勻，55-60℃溫浴10min1.5%Agrose膠檢測測定濃度進(jìn)一

3、步純化2所需試劑及用品：液氮氯仿異丙醇DEPC75%乙醇（DEPC處理的水配制）RNase-free水1.5ml離心管1ml、0.2ml、0.1ml、0.01ml槍頭各若干玻璃及塑料制品的處理：（均可用0.5%NaOH浸泡15min，用ddH2O沖洗干凈，滅菌備用。）玻璃器皿：150℃烘烤4hrs塑料制品：離心管和槍頭用含DEPC的ddH2O浸泡過夜，烘干，滅菌備用?；蛘撸?.5MNaOH浸泡10min，用ddH2O沖洗干凈，滅菌。RNase-freeddH2O：ddH2O+DEPC過夜（0.01~0.05%），滅菌備用。儀器：臺式高速冷凍離心機(jī)或者：大型高速冷凍離心機(jī)

4、磨樣用具Note:1.Alwaysweardisposablegloves.2.Usesterile,disposableplasticwareandautomaticpipettesreservedforRNAworktocross-contaminationwithRNasefromsharedequipment.3.DownstreamhandlingoftheTriZOLrequiresthatnondisposableglasswareorplasticwarebeRNase-free.4.Safetycare.2