生技整理考試重點

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1、說明：1、資料中未按名詞解釋、簡答等的次序排版，如有需要，大家自行解決。2、有些細節(jié)，大家自己去看課件補充吧3、愿大家順利。一、基因工程本章總體思路1、生物技術(shù)：包括基因工程、細胞工程、發(fā)酵工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程2、基因工程：在體外對DNA進行切割、拼接,使遺傳物質(zhì)重新組合,經(jīng)載體轉(zhuǎn)移到細胞中擴增表達,獲得人類所需產(chǎn)品,或組建新生物類型的技術(shù)。3、基因工程誕生的理論基礎：DNA是遺傳物質(zhì)；DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)；中心法則和遺傳密碼4、基因工程誕生的技術(shù)突破：DNA分子的體外切割與連接技術(shù)DNA分子的核酸序列分析技術(shù)5、基因工程元年

2、：1973年6、基因工程的特征：1.跨物種性：外源基因到另一種不同的生物細胞內(nèi)進行繁殖2、無性擴增：外源DNA在寄主細胞內(nèi)可大量擴增和高水平表達。1.1工具酶7、工具酶：（以下為常用工具酶）工具酶功能限制性核酸內(nèi)切酶識別特異序列，切割DNADNA連接酶催化DNA中相鄰的5′磷酸基和3′羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使DNA切口封合或使兩個DNA分子或片段連接DNA聚合酶Ⅰ①合成雙鏈cDNA分子或片段連接②缺口平移制作高比活探針③DNA序列分析④填補3′末端反轉(zhuǎn)錄酶①合成cDNA②替代DNA聚合酶I進行填補，標記或DNA序列分析（

3、含義：以RNA為模板合成DNA的DNA聚合酶）多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5′羥基末端磷酸化，或標記探針末端轉(zhuǎn)移酶在3′羥基末端進行同質(zhì)多聚物加尾（1、探針標記2、在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進行連接）堿性磷酸酶切除末端磷酸基（制備載體時，用堿性磷酸酶處理后，可防止載體自身連接）8、限制性核酸內(nèi)切酶(restrictionendonuclease,RE)：是一類能識別雙鏈DNA中特殊核苷酸序列,并在合適的反應條件下使每條鏈一定位點上的磷酸二酯鍵斷開，產(chǎn)生具有3’-OH基團和5’-磷酸基團的DNA片段的內(nèi)切脫氧核糖

4、核酸酶。分類:包括限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（基因工程技術(shù)中常用Ⅱ型）作用：與甲基化酶共同構(gòu)成細菌的限制修飾系統(tǒng)，限制外源DNA，保護自身DNA。9、平末端(bluntend):DNA的兩條鏈在同一位置被切開，產(chǎn)生末端長度相等的DNA片段，即平末端。粘末端(stickyend)：DNA分子的兩條鏈在不同的位置（中間隔2-4核苷酸）被切開，形成一條交錯的傷口，所得的DNA片段在末端都具有短的懸垂部分，即粘末端。10、同裂酶：來源不同的限制性內(nèi)切酶，但能識別和切割同一位點，這些酶稱同裂酶。同尾酶：有些限制性內(nèi)切酶雖然識別序列不完全

5、相同，但切割DNA后，產(chǎn)生相同的粘性末端，稱為同尾酶。這兩個相同的粘性末端稱為配伍未端(compatibleend)。11、DNA連接酶的連接方式：1、粘性末端連接2、平端連接3.末端修飾后進行連接4.人工接頭連接1.2載體(vector)12、載體：是指能在連接酶作用下和外源DNA片段連接，實現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質(zhì)所采用的DNA分子13、理想載體的基本條件：1、可轉(zhuǎn)移性2、具有安全性3、合適的復制位點4、多克隆位點：廣泛、特異5、選擇標志，便于篩選和鑒定6、分子較小，可容納較大的外源DNA14、質(zhì)粒：存在

6、于細菌染色體外的小型共價閉合環(huán)狀DNA分子。要求：含有復制起點；含有多克隆位點（MCS）；含有篩選標記；高拷貝數(shù)；分子量??；易于導入宿主細胞15、T-克隆載體：5’端帶一個不配對的堿基T，這樣的線性質(zhì)?？蓪CR產(chǎn)物以TA配對連接的方式直接進行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的載體被稱為T-克隆載體U-克隆載體：5’端帶一個不配對的堿基U的線性質(zhì)粒稱為U-克隆載體16、λ噬菌體克隆載體優(yōu)點：①其分子遺傳學背景十分清楚；②載體容量較大，能容納大約23kb的外源DNA片段；③具有較高的感染效率，其感染宿主細胞的效率幾乎可達100%。

7、λ噬菌體分類;(1)插入型載體（insertvector）：其限制酶位點可用于外源DNA的插入(2)取代型載體（replacementvector）：具有成對限制酶位點，外源DNA可取代兩個限制位點上的DNA區(qū)段。重組DNA與包裝蛋白混合，可在體外包裝成有感染力的重組噬菌體顆粒λ噬菌體應用：包裝范圍:36.4Kb--51.5kb?轉(zhuǎn)導效率:lμg重組DNA分子獲得10個以上的噬菌斑.用途:建立cDNA基因文庫,克隆外源目的基因。17、酵母人工染色體(YAC)把酵母染色體與基因復制和表達有關(guān)的主要組件都組裝在質(zhì)粒上，令質(zhì)粒行使酵

8、母的轉(zhuǎn)錄功能和復制功能。特點:能容納長達1000kb--3000kb的外源DNA片段用途:構(gòu)建基因組文庫，基因治療和基因功能鑒定。18、表達載體（expressingvector）表達載體是用來在受體細胞中表達外源基因的載體。表達載體常由克隆載體改造而來。1.3目的基因20、