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《大鼠腦組織石蠟切片免疫組化的體會(huì)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013年4月，第44卷第4期·311·大鼠腦組織石蠟切片免疫組化的體會(huì)**郭林芝，李靈敏(山西醫(yī)科大學(xué)病理教研室，太原030001;通訊作者，E-mail:lilingminppm@163．com)摘要:目的探討一種大鼠腦組織石蠟切片免疫組化切實(shí)可行的技術(shù)方案，并得到滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。方法改進(jìn)石蠟切片制作過程，以大鼠海馬神經(jīng)元caspase－3染色為例，按SABC法進(jìn)行免疫組化染色。結(jié)果組織切片完整均勻，海馬區(qū)組織、細(xì)胞形態(tài)正常，未見擴(kuò)張的毛細(xì)血管，可清晰見到細(xì)胞質(zhì)和/或核呈棕黃色的陽性細(xì)胞，細(xì)胞核呈紫藍(lán)色的正常細(xì)胞，背景染色少。結(jié)論通過
2、對(duì)大鼠腦組織取材、脫水、以及采用合理抗原修復(fù)液等方面的改進(jìn)，可以較好解決大鼠腦組織免疫組化染色中出現(xiàn)的問題，提高免疫組化染色質(zhì)量。關(guān)鍵詞:腦組織;石蠟切片;免疫組化中圖分類號(hào):R－331文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1007－6611(2013)04－0311－02DOI:10．3969/J．ISSN．1007－6611．2013．04．019Experienceofimmunohistochemicalstainingonparaffinsectionsofbraintissuesinrats**GUOLinzhi，LILingmin(DeptofPathol
3、ogy，ShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001，China;Correspondingauthor，E-mail:lilingminppm@163．com)Abstract:ObjectiveToexploreapracticaltechnicalprocessofimmunohistochemistryontheparaffinsectionsofratbraintissuesforobtainingthesatisfactoryresults．MethodsThecaspase-3staininginrathippo
4、campalneuronswasdoneaccordingtoSABCmethodafterimprovingthesection-preparingprocess．ResultsTissuesectionswerecompleteanduniform，thehippocampustissueandcellmorphologywerenormal．Theexpansionofthecapillarieswasnotseen．Thepositivecellsthatcytoplasmand/ornuclearbrownareyellowandthenorma
5、lcellsthatnucleiarepurpleandbluewereclearlyseen，andthebackgroundstainingwasless．ConclusionTheimprovementonratbraintissueselected，dehydration，andreasonableantigenretrievalsolutionintheexperimentscouldimprovethequalityofimmunohistochemicalstaining．Keywords:braintissue;paraffinsectio
6、ns;immunohistochemistry隨著神經(jīng)科學(xué)的不斷發(fā)展和深入研究，腦組織1．3方法石蠟切片免疫組化越來越多的被作為神經(jīng)學(xué)研究的1．3．1取材與固定與以往多采用直接處死大鼠主要方法之一。但是由于腦組織本身比較柔軟，含取腦固定不同，我們采用大鼠心臟灌注固定?。?］水量大等特點(diǎn)，腦組織石蠟切片的免疫組化染色結(jié)腦，10%的水合氯醛大鼠腹腔麻醉，剪開胸腔暴果，易出現(xiàn)切片染色不清楚，脫片、假陽性，假陰性出露心臟，將灌流針從心尖插入經(jīng)左心室直至主動(dòng)脈，現(xiàn)。因此要想得到一張理想的腦組織石蠟切片，并同時(shí)剪開右心耳，快速注入生理鹽水約200ml，看到且能通過免疫
7、組化染色達(dá)到清晰的特異性蛋白表達(dá)肝臟變白，然后緩慢注入4%中性甲醛600ml，整個(gè)圖片一直是許多研究者的難點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)室通過長(zhǎng)期灌注固定時(shí)間大約持續(xù)3h。隨后斷頭取腦，于視交試驗(yàn)探索出一套大鼠腦組織石蠟切片免疫組化的方叉后4mm處即海馬平面取腦組織，大小約1．5cm案，并將其體會(huì)介紹給同行?！?cm×0．5cm，放入4%的中性甲醛后固定6h。1材料1．3．2脫水、包埋、切片脫水是腦組織制片最關(guān)1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物鍵、最容易失敗的過程，本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過多次脫水條件健康雄性SD大鼠，6－8周，體重200－250g的探索，最后梯度乙醇脫水過程為75%乙醇過夜，(山西醫(yī)科大學(xué)
8、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。85%乙醇3h，95%乙醇Ⅰ1．5h，95%乙醇Ⅱ
