瓊脂稀釋法測(cè)定抗菌藥物最低抑菌濃度(MIC)

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1、瓊脂稀釋法測(cè)定抗菌藥物最低抑菌濃度(MIC)

2、瓊脂稀釋法瓊脂稀釋法是將不同劑量的抗菌藥物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH瓊脂中，制成含不同遞減濃度抗菌藥物的平板，接種受試菌，孵育后觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的瓊脂平板所含最低藥物濃度為MIC。本法優(yōu)點(diǎn)是可在一個(gè)平板上同時(shí)作多株菌MIC測(cè)定，結(jié)果可靠，易發(fā)現(xiàn)污染菌；缺點(diǎn)是制備含藥瓊脂平板費(fèi)時(shí)費(fèi)力。1.培養(yǎng)基制備使用MH瓊脂，按商品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制，pH7.2~7.4。淋病奈瑟菌使用GC瓊脂基礎(chǔ)加1%添加劑；其它鏈球菌使用含5%（V/V）綿羊血的MH瓊脂（當(dāng)試驗(yàn)磺胺藥時(shí)，

3、使用溶解的馬血）。2.含藥瓊脂平板制備根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將已倍比稀釋的不同濃度的抗菌藥物分別加入已加熱溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH瓊脂中，充分混勻傾倒滅菌平皿，瓊脂厚度3~4mm。通常按1∶9比例配制藥物瓊脂平板，根據(jù)需要來(lái)選擇藥物濃度范圍。配制好的含藥瓊脂平板應(yīng)裝入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可貯存5天。3.接種物制備與接種制備濃度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管的菌懸液，再1∶10稀釋?zhuān)远帱c(diǎn)接種器吸取制備好菌液（約1~2μl）接種于瓊脂平板表面，每點(diǎn)菌數(shù)約為104CFU，形成直徑為5~8mm的菌斑。接種好后置35℃孵育

4、16~20h（甲氧西林耐藥葡萄球菌、萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌孵育時(shí)間應(yīng)滿24h），觀察結(jié)果。奈瑟菌屬、鏈球菌屬細(xì)菌置5%二氧化碳、幽門(mén)螺桿菌置微需氧環(huán)境中孵育。4.結(jié)果判斷將平板置于暗色、無(wú)反光物體表面上判斷試驗(yàn)終點(diǎn)，以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為MIC。在含甲氧芐胺嘧啶或磺胺瓊脂平板上可見(jiàn)輕微細(xì)菌生長(zhǎng)，與生長(zhǎng)對(duì)照比較抑制80%以上細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度作為終點(diǎn)濃度。如果出現(xiàn)有2個(gè)以上菌落生長(zhǎng)于含藥濃度高于終點(diǎn)水平的瓊脂平板上，或低濃度藥物瓊脂平板上不長(zhǎng)而高濃度藥物瓊脂平板上生長(zhǎng)現(xiàn)象，則應(yīng)檢查培養(yǎng)物純度或重復(fù)試驗(yàn)。