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《瀕危植物夏蠟梅issr擴(kuò)增條件的優(yōu)化》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第27卷第1期植物研究2007年1月Vol.27No.1BULLETINOFBOTANICALRESEARCHJan.,2007瀕危植物夏蠟梅ISSR擴(kuò)增條件的優(yōu)化金則新李鈞敏(臺(tái)州學(xué)院生態(tài)研究所,臨海317000)摘要為了確保ISSR分析結(jié)果的可靠性和重復(fù)性,有必要進(jìn)行ISSR2PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化。以瀕危植物夏蠟梅的基因組DNA為研究對(duì)象,利用單因素試驗(yàn),測(cè)試了ISSR2PCR反應(yīng)體系中鎂離子,dNTP,模板DNA含量,TaqDNA聚合酶量、BSA濃度、引物濃度、甘油濃度等7種因素對(duì)反應(yīng)結(jié)果的影響,經(jīng)過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
2、,建立了夏蠟梅ISSR2PCR最佳反應(yīng)體系:10μLPCR反應(yīng)體積,1×Taq酶配-1-1-1套緩沖液(10mmol·LTris·HClpH910,50mmol·LKCl,011%TritonX2100),115mmol·LMgCl2,0175UTaq酶(上海華美公司),20ng模板DNA,6pmol引物(上海Sangon公司);dATP、-1dCTP、dGTP、dTTP各0115mmol·L。利用優(yōu)化反應(yīng)體系從100個(gè)ISSR引物中共篩選出12個(gè)穩(wěn)定性好、重復(fù)性高的引物,對(duì)10個(gè)居群共200個(gè)夏蠟梅個(gè)體的DNA進(jìn)
3、行擴(kuò)增,共擴(kuò)增出156個(gè)條帶,其中多態(tài)條帶為114個(gè),總的多態(tài)位點(diǎn)百分率為73108%。各居群的多態(tài)位點(diǎn)百分率有較大差異,平均為23165%。夏蠟梅ISSR反應(yīng)體系的建立為利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)研究夏蠟梅的遺傳多樣性奠定了良好的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞夏蠟梅;ISSR;優(yōu)化;遺傳多樣性O(shè)ptimizationofISSRAmplificationConditionsinEndangeredPlantSinocalycanthuschinensisJINZe2XinLIJun2Min(InstituteofEcology,Ta
4、iZhouUniversity,Linhai317000)AbstractItwasnecessarytooptimizetheISSRamplificationconditionstoensurethereplicationandstabilityinthePCRamplification.TheISSRamplificationconditionsofendangeredplantSinocalycan22+thuschinensiswasoptimizedandtheeffectof7factorssucha
5、sMgconcentration,dNTPconcentration,DNAtemplatesdosage,TaqDNApolymerasedosage,BSAconcentration,primerdosageandglycerolconcentrationonISSRamplificationweretestedusingsinglefactormethod.TheoptimalamplificationconditionsofISSRforSinocalycanthuschinensisweredetermi
6、nedasfollows:1Taqpolymerasecorre2-1-1spondingbuffer(10mmol·LTris·HClpH910,50mmol·LKCl,011%TritonX2100),115-1-1mmol·LMgCl2,0175UTaqDNApolymerase,20ngtemplateDNA,6pmolprimer,0115mmol·LdATP,dCTP,dGTP,dTTPforeachintotal10μLreactionvolume.Usingtheseoptimalamplifica
7、tionconditions,12stableandrepeatableISSRprimerswereselectedfromtotal100primers.156lociwereproducedintotal10Sinocalycanthuschinensispopulationswith200individuals.Therewere114poly2morphiclociamongthemandthetotalpolymorphiclocipercentagewas73108%.Thepolymorphiclo
8、cipercentageineverypopulationwasquitedifferentwithameanof23165%.Theestablishmentofthe基金項(xiàng)目:浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(Y5042200)第一作者簡(jiǎn)介:金則新(1960—),男,碩士,教授,從事植物生態(tài)學(xué)研究。收稿日期:2006-01-191期金則新等:瀕危植物夏蠟梅ISSR
