里氏木霉木聚糖酶基因xyn2的克隆與表達(dá)

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1、第29卷第5期南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報Vol.29No.52007年9月JOURNALOFNANJINGUNIVERSITYOFTECHNOLOGYSep.2007里氏木霉木聚糖酶基因XYN2的克隆與表達(dá)1211王向明,歐陽嘉,嚴(yán)明,許琳(1.南京工業(yè)大學(xué)制藥與生命科學(xué)學(xué)院,江蘇南京210009;2.南京林業(yè)大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院,江蘇南京210037)摘要:采用RT2PCR(reverse2transcriptionPCRassay)技術(shù),從里氏木霉QM9414mRNA中擴(kuò)增出木聚糖酶基因XYN2,并與質(zhì)粒pYX212相連,構(gòu)建了組成型表達(dá)載體pYX212/XYN2.將此重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化

2、入釀酒酵母菌株YPH499進(jìn)行表達(dá).分析了不同碳源、溫度、搖瓶轉(zhuǎn)速、初始pH對其產(chǎn)酶的影響.實驗結(jié)果表明,最佳碳源是葡萄糖,最佳轉(zhuǎn)速是260r/min,最佳初始pH是610.優(yōu)化重組菌的發(fā)酵條件后得到的最大酶活為0155IU/mL.關(guān)鍵詞:RT2PCR;TrichodermareeseiXYN2基因;釀酒酵母;克隆;表達(dá)3中圖分類號:Q786文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1671-7627(2007)05-0082-06CloningandexpressionoftheT.reeseixylanasegeneXYN21211WANGXiang2ming,OUYANGJia,YA

3、NMing,XULin(1.CollegeofLifeScienceandPharmaceuticalEngineering,NanjingUniversityofTechnology,Nanjing210009,China;2.CollegeofChemicalEngineering,NanjingForestryUniversity,Nanjing210037,China)Abstract:XYN2genefragmentsweresuccessfullyamplifiedfromTrichodermareeseistrainQM9414mRNAbyRT2PCR(re

4、verse2transcriptionPCRassay)technologyandwereligatedtopYX212vectorastheexpressionvectorpYX212/XYN2.SaccharomycescerevisiaYPH499competentcellsweretransformedwiththerecombinantplasmidandbeganexpressing.Theeffectsofdifferentcarbonsources,temperature,rotaryspeedandinitialpHonxylanaseproductio

5、noftherecombinantwereinvrstigated.Theresultindicatsthattheoptimalcarbonsourceisglucose,theoptimaltemperatureis30℃,theoptimalrotaryspeedis260r/min,andtheoptimalinitialpHis610.Themaxi2mumxylanaseactivityoftherecombinantis0155IU/mLafteroptimizingthefermentationcondition.Keywords:RT2PCR;Trich

6、odermareeseiXYN2gene;Saccharomycescerevisia;clone;expression為了應(yīng)對全球化的能源危機(jī),人們正在尋找新素的木聚糖酶對充分利用自然界的可再生資源生產(chǎn)的替代能源.與石油能源相比較,生物乙醇由于具有乙醇具有重要意義.環(huán)保、其生產(chǎn)原料可再生等特點(diǎn),因此,國內(nèi)外研發(fā)木聚糖酶(xylanases)(EC3.2.1.8)是木聚糖[1]生物乙醇已成為當(dāng)今的熱點(diǎn).半纖維素作為生物水解酶系中最關(guān)鍵的酶,可水解木聚糖主鏈骨架的乙醇可再生原料的主要成分,占自然界中植物碳水β21,4木糖苷鍵.該酶可由以微生物為主的多種生化合物總量的1/3,

7、而木聚糖(xylan)是植物半纖維物合成,包括細(xì)菌、黑曲霉、木霉等,其水解產(chǎn)物主要素(hemicellulase)的主要成分,其占單葉和闊葉植為低聚木糖(xylo2oligosaccharides)、少量的木糖和阿[2][2][3]物干質(zhì)量的35%.因此,研究可降解植物半纖維拉伯糖.laGrange等研究了組成型PGK啟動子3收稿日期:2007203220基金項目:國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(“973”計劃)資助項目(2003CB615701);國家自然科學(xué)基金資助項目(20336010)作者簡介:王向明(1980—),男,江蘇