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《大鼠多巴胺(da)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、大鼠多巴胺（DA）酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒使用說明書本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!預期應用ELISA法定量測定大鼠血清、血漿或其它相關生物液體中DA含量。實驗原理用純化的DA抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的DA抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物（TMB）顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的DA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1
2、、酶標板：一塊（96孔）2、標準品（凍干品）：2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為4,000pg/ml，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成4,000pg/ml，2,000pg/ml，1,000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，樣品稀釋液直接作為空白孔0pg/ml。如配制2,000pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）4,0
3、00pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。3、樣品稀釋液：1×20ml。4、檢測稀釋液A：1×10ml。5、檢測稀釋液B：1×10ml。6、檢測溶液A：1×120/瓶（1:100）。臨用前以檢測稀釋液A1:100稀釋（如：10檢測溶液A/990檢測稀釋液A），充分混勻，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（100/孔），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。7、檢測溶液B：1×120/瓶（1:100）。臨用前以檢測稀釋液B1:10
4、0稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。8、底物溶液：1×10ml/瓶。9、濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10、終止液：1×10ml/瓶（2mol/LH2SO4）。11、覆膜：5張12、使用說明書：1份自備物品1、酶標儀（建議儀器使用前提前預熱）2、微量加液器及吸頭，EP管3、蒸餾水或去離子水，濾紙標本的采集及保存1、血清：全血標本請于室溫放置2小時或4過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存，但應避免反復凍融。2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝
5、劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于1000g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存，但應避免反復凍融。3、其它生物標本：請1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存，但應避免反復凍融。注：以上標本均應密封保存，4保存應小于1周，-20不應超過1個月，-80不應超過2個月；標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。操作步驟實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫，試劑不能直接在37溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含
6、量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。1、加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00，余孔分別加標準品或待測樣品100，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37溫育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100（臨用前配制），酶標板加上覆膜，37溫育1小時。3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3
7、次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。4、每孔加檢測溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時。5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。6、每孔加底物溶液90，酶標板加上覆膜37避光顯色（反應時間控制在15-30分鐘，當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯時，即可終止）。7、每孔加終止溶液50，終止反應，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。8、立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）
8、。注：1、試劑準備：所有試劑在使用前應平衡至室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。2、加樣：加樣或加試劑時，第一個孔與最后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）最好控制在10分鐘內(nèi)。推薦設置復孔進行實驗。3、溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應
