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《干擾RNA與腫瘤治療研究現(xiàn)狀及展望》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、干擾RNA與腫瘤治療研究現(xiàn)狀及展望1提綱概述RNAi的發(fā)現(xiàn)RNAi作用機制RNAi的技術(shù)的應(yīng)用及實驗步驟RNAi作用的特點RNAi與腫瘤治療SiRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)存在的問題與展望2概述RNA干擾(RNAinterference,RNAi)：又稱為轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcriptionalgenesilencing,PTGS)。其原理是將特異性雙鏈RNA(dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞，誘導(dǎo)同源的mRNA降解，導(dǎo)致目的基因表達(dá)沉默或表達(dá)水平下降。2001、2002年連續(xù)被Science評為年度十大成就之一！3RNAi
2、的發(fā)現(xiàn)41990年Jorgensen等矮牽?；伾由顚嶒灩惨种?co-suppression）51995年Guo和Kemphues反義核酸技術(shù)關(guān)閉秀麗隱桿線蟲(C.elegans)par-1基因的表達(dá)實驗（秀麗隱桿線蟲）研究者對此現(xiàn)象無法解釋61998年Andy.ZFire和Craig.CMello等秀麗隱桿線蟲（C.elegans）反義RNA抑制實驗7(uninjected,mex-3probe)(antisensemex-3RNA,mex-3probe)(double-strandedmex-3RNAinj
3、ected,mex-3probe)(uninjected,noprobe)將這一現(xiàn)象稱為“RNA干擾”81999，2000年92001年1011RNAi作用機制12RNAi作用機制圖識別并降解mRNA啟動階段效應(yīng)階段Dicer的切割RISC的形成與激活倍增階段131.啟動階段長dsRNA進入細(xì)胞后，首先被Dicer酶特異性地裂解成21～23核苷酸（nt）的siRNA，Dicer的切割2.效應(yīng)階段RISC的形成與激活siRNA結(jié)合到RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合體（RISC），該復(fù)合體依賴ATP釋能而解聚siRNA雙鏈成
4、單鏈以激活RISC。激活的RISC通過堿基配對定位到同源mRNA上，并在距離siRNA3’端12個堿基的位置切割mRNA，導(dǎo)致基因沉默效應(yīng)識別并降解mRNA3.倍增階段siRNA一方面可引導(dǎo)RISC特異性剪切同源單鏈mRNA，使mRNA降解。另一方面siRNA還可作為引物與靶向mRNA結(jié)合，在RNA依賴性RNA多聚酶(RdRP)的作用下合成新的dsRNA，新合成的dsRNA再次經(jīng)Dicer酶切割，形成新的siRNA，并作用于靶向mRNA。如此反復(fù)、倍增，從而使RNAi的作用進一步放大，最終使靶向mRNA全部降解。
5、RNAi作用的特點1高序列特異性2高效性3濃度、時間雙重依賴性4RNAi作用的靶基因位點有選擇性5可傳播性6可遺傳性17RNAi技術(shù)的應(yīng)用及實驗步驟18RNAi與腫瘤治療1.封閉原癌基因2.封閉細(xì)胞凋亡相關(guān)基因3.封閉周期相關(guān)基因4.封閉腫瘤血管生成相關(guān)基因5.封閉腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因6.封閉耐藥基因b腫瘤相關(guān)mRNA降解ac191.封閉原癌基因骨橋蛋白(osteopontin，OPN)在大多數(shù)胃癌中過表達(dá)，并與胃癌的發(fā)病相關(guān)，RNAi抑制人胃癌細(xì)胞中的OPN的表達(dá)，能有效抑制胃癌細(xì)胞的生長、遷移和侵襲。研究表明腎癌
6、細(xì)胞中檢測到OPN的表達(dá)，利用siRNA下調(diào)OPN的表達(dá)后伴有線粒體相關(guān)凋亡通路的激活以及MMP-2和uPA等侵襲相關(guān)蛋白的表達(dá)下調(diào)，顯著增加腫瘤細(xì)胞的凋亡同時減少其侵襲能力。202.封閉細(xì)胞凋亡抑制基因在腫瘤的發(fā)病機制中凋亡受抑是腫瘤細(xì)胞惡性克隆增殖的基礎(chǔ)。凋亡抑制蛋白家族(inhibitorofapoptosisproteins，IAPs)是一類結(jié)構(gòu)上相似的蛋白質(zhì)，目前已發(fā)現(xiàn)了8種IAP:X染色體相關(guān)IAP(XIAP)，細(xì)胞IAP(c-IAP1，c-IAP2)、神經(jīng)元IAP、Survivin、Apollon、
7、Livin、和IAP樣蛋白-2。212.封閉細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Ma等研究發(fā)現(xiàn)c-IAP1，c-IAP2在骨肉瘤中表達(dá)升高，并且利用RNAi封閉c-IAP1，c-IAP2后可抑制骨肉瘤的生長。223.封閉周期相關(guān)基因CyclinE是細(xì)胞從G1期到S期轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵分子,在許多腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),Todd等[21]發(fā)現(xiàn)在70%的RB+/p16+卵巢腫瘤中cyclinE表達(dá)異常增高，利用siRNA抑制cyclinE的表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞大量蓄積于G1期，從而認(rèn)為cyclinE是卵巢癌又一潛在的治療靶點。細(xì)胞周期蛋白(cyclin)
8、D1作為細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子之一，其過表達(dá)是多種人原發(fā)性腫瘤的特征，對腫瘤的診斷和預(yù)后判定具有重要意義。Deharvengt等[22]在胰腺癌中利用靶向cyclinD1的shRNA降低cyclinD1蛋白水平，能減少腫瘤細(xì)胞體外生長和侵襲及體內(nèi)腫瘤血管形成。234.封閉腫瘤血管生成相關(guān)基因VEGF被認(rèn)為是最主要的血管生成因子，Yang等根據(jù)VEGF的基因序列設(shè)計了特異性的si
