人類外周血DNA 提取

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1、實(shí)驗(yàn)四人類基因組DNA提取【目的】掌握人基因組DNA的抽提方法?！驹怼繌牟煌M織細(xì)胞或血細(xì)胞中提取高質(zhì)量的DNA是進(jìn)行基因診斷的先決條件?；蚪MDNA可以從任何有核細(xì)胞中提出，人外周血中的淋巴細(xì)胞是抽提基因組DNA最方便的材料。由于DNA在細(xì)胞核內(nèi)是與蛋白質(zhì)形成復(fù)合物的形式存在的，因此提取過(guò)程中必須將其中的蛋白質(zhì)除去，SDS可將細(xì)胞膜、核膜破壞，并將組蛋白從DNA分子上分離，使核蛋白上的核酸游離。EDTA可抑制細(xì)胞中DNase活性。蛋白酶K可以用于消化細(xì)胞核膜以及核內(nèi)蛋白質(zhì)，RNase除去核酸中的RNA。再用苯酚氯仿抽提可進(jìn)一步使蛋白質(zhì)變性而與核酸分開(kāi)，再經(jīng)無(wú)水乙醇沉淀，最后可得到比

2、較純凈的DNA?！驹噭客庵苎蚪MDNA提取試劑盒【操作步驟】1.取200ul新鮮、加入抗凝劑的血液。2.加入20ul蛋白酶K（20mg/ml），混勻。3.加入200ul緩沖液GB，充分顛倒混勻，70度放置10分鐘，溶液應(yīng)變清亮，簡(jiǎn)短離心以除去管蓋內(nèi)壁的水珠。4.加200ul無(wú)水乙醇，充分振蕩混勻15秒，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡(jiǎn)短離心以除去管蓋內(nèi)壁的水珠。5.將上一步所得的絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管），12000rpm離心30秒，倒掉廢液，吸附柱CB3放回收集管中。6.向吸附柱CB3中加入500ul去蛋白液GD，12000rpm離心30秒，倒掉廢液，吸附柱C

3、B3放回收集管中。7.向吸附柱CB3中加入700ul漂洗液PW，12000rpm離心30秒，倒掉廢液，吸附柱CB3放回收集管中。8.向吸附柱CB3中加入500ul漂洗液PW，12000rpm離心30秒，倒掉廢液。9.將吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm離心2分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。將吸附柱置于室溫或50度水浴鍋數(shù)分鐘，以徹底涼干吸附材料中殘余的漂洗液。10.將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間部位懸空滴加50-200ul經(jīng)56度水浴預(yù)熱的洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心30秒。1.離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置2分鐘

4、，12000rpm離心2分鐘。即得到DNA。2.瓊脂糖凝膠電泳鑒定