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1、ca/T18086-2000前言煙霜霉病是我國進(jìn)境植物檢疫危險(xiǎn)性病害，為了防止該病菌隨寄主傳人我國，在進(jìn)境檢疫時(shí)，需正確掌握煙霜霉病菌的檢疫鑒定方法本標(biāo)準(zhǔn)在制定過程中，經(jīng)過調(diào)查研究，分析有關(guān)資料和總結(jié)多年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，以及根據(jù)煙霜霉病菌的生物學(xué)特性、病理學(xué)原理，確定各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)。本標(biāo)準(zhǔn)給出煙霜霉病病原菌的抱囊梗和抱囊及卵抱子的形態(tài)特征，兩者可同時(shí)或單獨(dú)作為煙霜霉病菌的鑒定依據(jù)。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是提示的附錄，附錄中的“冰凍勻漿法”是檢驗(yàn)煙霜霉病菌卵抱子的一種較先進(jìn)的方法，但目前在國內(nèi)尚未普及，故在檢驗(yàn)煙霜霉病菌時(shí)，若條件允許，也可采用此法檢驗(yàn)該病原產(chǎn)生的卵抱子本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部提出
2、本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位:中華人民共和國廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:李怡珍、章正、鐘國強(qiáng)、張傳飛。中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)植物檢疫cB/T18086---2000煙霜霉病菌檢疫鑒定方法Plantquarantine-MethodsforinspectionandidentificationofPeronosporahyoscyamideBaryf.sp.tabacina(Adam)Skalichy1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了進(jìn)境植物檢疫中對煙霜霉病菌的檢疫鑒定方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于進(jìn)境干煙葉和煙屬植物種子、種苗的煙霜霉病菌檢疫和鑒定。2原理煙霜霉病菌為專性寄生菌，煙葉被侵染為害后，出
3、現(xiàn)邊緣模糊、褪綠的近圓形斑點(diǎn)，后期形成淡褐色可脫落的壞死病斑。在適宜溫濕度條件下，葉背面病斑長出淡藍(lán)色霉?fàn)钗?，即煙霜霉病菌的抱囊梗和袍?在一定條件下，病組織內(nèi)可形成卵抱子。病原菌的寄生?；约捌湫螒B(tài)學(xué)特征是鑒定煙霜霉病菌的依據(jù)。3儀器、試劑3.1手持?jǐn)U大鏡。3.2帶光源的擴(kuò)大鏡。3.3雙目解剖鏡(lox-50x).3.4顯微鏡(10OX一100OX)。3.5離心機(jī)(1000r/min-4000r/min).3.6不銹鋼篩(孔徑60[=).3.7振蕩器(200r/min),3.80.02mol/L磷酸緩沖液(pH=7)o3.9苯胺藍(lán)。3.10乳酚油乳酚油配制:苯酚結(jié)晶(水
4、浴加熱溶化)20mL、乳酸20mL、甘油40mL,蒸餾水20m工混合而成。3.111o%氫氧化鉀溶液氫氧化鉀溶液配制:取氫氧化鉀10g，加水90mL溶解配成10%氫氧化鉀溶液。4抽樣4門抽查取樣前查驗(yàn)待檢煙葉的有關(guān)單證，核實(shí)產(chǎn)地、包裝、嘖頭、品名、級別、收獲年份及數(shù)量42用隨機(jī)方法在貨柜車、船艙、倉庫堆位的上、中、下各層開件抽查，檢查包內(nèi)煙葉是否有可疑疫情隨機(jī)在包內(nèi)的各個(gè)部位取樣，注意抽取等級差、葉色暗淡無光澤的煙葉帶回室內(nèi)檢驗(yàn)4.3抽查件數(shù)國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局2000一04一26批準(zhǔn)2000一，0一01實(shí)施cB/T18086-2000按貨物批量總件數(shù)0.5%一10%開件抽
5、查取祥，500件以下的抽查20件，少于20件的全批抽查。其余開件抽查件數(shù)如表工:表1進(jìn)境煙葉檢疫抽杳表批量25件數(shù)，件抽查件數(shù)，件500以卜(含500了十)501-100021~301001-300031-403001-500041^507001一10000517010001以I-71-1004.4取樣質(zhì)量香料煙、打葉片煙每批取樣6kg-15kg扎把煙每批取樣20kg-40kge4.5煙屬種子、種苗的抽樣每批按2，件數(shù)的5Yo-20%抽查，種子每批取樣檢驗(yàn)20g-50g，種苗每批取樣檢驗(yàn)100株以上，少于10。株的全檢。5煙葉檢驗(yàn)方法5.1病葉檢查在光線充足處，逐片檢查煙
6、葉有無煙霜霉病的可疑癥狀，葉背有無灰褐色的霜霉層5.2病原菌檢驗(yàn)5.2，直接鏡檢用解剖針挑取病斑上的霉?fàn)钗镏破R檢，用顯微鏡觀察有無病原菌的泡囊梗和飽囊，記錄其形態(tài)特征，必要時(shí)測量袍囊梗的長度和抱囊的大小。5.2.2洗滌檢驗(yàn)將未發(fā)現(xiàn)霜霉層的可疑病斑及碎片，置250ml_三角瓶內(nèi)，加人適量蒸餾水浸軟后，用振蕩器激烈震蕩5min，洗下病斑表面的病原物，將洗滌液倒進(jìn)離心管，以1000r/min離心5min,傾去上層清液，取沉淀液置載玻片上，蓋上蓋玻片，用顯微鏡檢查有無煙霜霉病菌的抱囊梗和抱囊，每批樣品至少檢查10個(gè)玻片5.2.3葉組織透明法檢驗(yàn)卵抱子選取病葉上霉?fàn)钗锵∩俚睦喜“?/p>
7、置于小燒杯中，加適量1000氫氧化鉀溶液(或其他葉組織透明試劑)，煮沸5min-10min至葉組織透明，加。.05%苯胺藍(lán)(棉藍(lán))乳酚油作浮載劑，置顯微鏡下逐片觀察有無卵抱子5.2.4冰凍勻漿法檢驗(yàn)卵抱子(見附錄A)5.3樣品的保存經(jīng)檢驗(yàn)完畢的大宗煙葉的樣品，香料煙、打葉片煙等每批留樣1kg-2kg，扎把煙每批留樣2kg-4kg，注明煙樣的合同號、產(chǎn)地、品名、級別、收獲年份、抽樣地點(diǎn)、時(shí)間等項(xiàng)目后分別存放于干燥、防蟲處保存2個(gè)月。發(fā)現(xiàn)有煙霜霉病葉的樣品，至少保存6個(gè)月，以備復(fù)檢、談判和仲裁。保存期滿后需作滅菌處理6煙屬植物的種
