馬鈴薯脫毒試管薯苗的快速繁殖與移栽(實驗報告)

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1、本科學生綜合性實驗報告學號114120***姓名￥*@學院生命科學學院專業(yè)、班級11應用生物教育？班實驗課程名稱植物組織培養(yǎng)實驗教師及職稱龍維彪（講師）開課學期2013至2014學年下學期填報時間2014年6月10日云南師范大學教務處編印一．實驗設計方案實驗序號二實驗名稱馬鈴薯脫毒試管薯苗的快速繁殖與移栽實驗時間2014.4.14——2014.6.6實驗室睿智樓3幢325實驗內(nèi)容：2-1馬鈴薯試管苗快速繁殖培養(yǎng)基的配制2-2馬鈴薯脫毒試管苗的快速繁殖2-3馬鈴薯試管薯苗的移栽1．實驗目的：1)、通過本次

2、實驗，使學生掌握配制培養(yǎng)基的步驟，能熟練準確配制培養(yǎng)基，并能根據(jù)實驗目的設計適合的培養(yǎng)基配方；2）、通過本次實驗，掌握馬鈴薯脫毒試管苗快速繁殖的基本技術；了解馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)的過程，為馬鈴薯脫毒種薯的生產(chǎn)提供必要的基礎苗；3）、通過本次實驗，掌握馬鈴薯試管薯誘導的方法和技術。2．實驗原理、實驗流程或裝置示意圖實驗原理1）、將事先配制好的培養(yǎng)基母液按一定比例稀釋至濃度為培養(yǎng)基中規(guī)定的使用濃度，再加入瓊脂、蔗糖、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)等，制備成符合要求的培養(yǎng)基。2）、利用適宜的培養(yǎng)基，誘導帶有腋芽的馬鈴薯單節(jié)莖段進

3、行芽生長和根再生形成單苗，從而達到快速繁殖的目的。3）、在培養(yǎng)馬鈴薯脫毒試管苗的培養(yǎng)容器中（試管苗培養(yǎng)4-6周），加入液體的馬鈴薯試管薯誘導培養(yǎng)基，置于全黑暗條件下即可誘導馬鈴薯試管苗結薯[1]。實驗流程Ⅰ、馬鈴薯脫毒種薯的生產(chǎn)程序①脫毒苗的培育；a.植物材料的選取；b.材料的處理；c.莖尖剝離；d.培養(yǎng)；e.病毒檢測；f.無病毒苗的擴繁。②原原種的生產(chǎn)；③原種生產(chǎn)；④一級種薯生產(chǎn)；⑤二級種薯生產(chǎn)。Ⅱ、馬鈴薯試管苗快速繁殖培養(yǎng)基的配制流程（1）、藥品及用具的準備；（2）、培養(yǎng)基配制（3）、調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸

4、堿性至pH6.2；（4）、培養(yǎng)基的分裝；（5）培養(yǎng)基的滅菌。Ⅲ、馬鈴薯脫毒試管苗的快速繁殖（1）準備工作；（2）無菌操作Ⅳ、馬鈴薯試管薯苗的移栽3．實驗設備及材料1）實驗用具和儀器冰箱、普通天平、果醬瓶、移液管、量筒、燒杯、玻璃棒、醫(yī)用口杯、精密pH試紙（pH5.4~7.0）、藥勺、稱量紙、酒精棉球、小塊紗布、已滅菌濾紙、槍狀鑷子、手術剪、解剖刀、已滅菌培養(yǎng)皿、酒精燈、封口膜、橡皮筋/棉線、電爐/電磁爐、高壓蒸汽滅菌鍋、超凈工作臺等。2）藥品和試劑：MS培養(yǎng)基母液、瓊脂、蔗糖、蒸餾水、1mol·L-1H

5、Cl、1mol·L-1NaOH、馬鈴薯快速繁殖培養(yǎng)基、75%消毒酒精、95％酒精。3)材料：馬鈴薯脫毒試管苗、培養(yǎng)4-6周的馬鈴薯脫毒試管苗。4．實驗方法步驟及注意事項實驗步驟：Ⅰ、馬鈴薯試管苗快速繁殖培養(yǎng)基的配制馬鈴薯試管苗快速繁殖培養(yǎng)基的配方設計及配制體積培養(yǎng)基配方設計：（1）根據(jù)培養(yǎng)的目的選擇一種培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基。（2）確定培養(yǎng)基中各種激素的濃度及相對比例。配方：MS基本培養(yǎng)基＋0.7％瓊脂＋3％蔗糖[2]配制體積：每小組配制0.5L，用果醬瓶分裝成10瓶，每人2瓶。馬鈴薯試管苗快速繁殖培養(yǎng)基的

6、配制流程（1）藥品及用具的準備；（2）培養(yǎng)基配制；（3）調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸堿性至pH6.2；（4）培養(yǎng)基的分裝；（5）培養(yǎng)基的滅菌。Ⅱ、馬鈴薯脫毒試管苗的快速繁殖（1）準備工作①接種室的清潔和消毒；②超凈工作臺的開機和消毒；③剪刀、鑷子、已滅菌培養(yǎng)皿、酒精棉球、酒精燈、待用培養(yǎng)基等的準備；④實驗材料的準備。（2）無菌操作①實驗操作前，操作人員洗手及手和小臂消毒；②使用的鑷子、剪刀等用95％酒精浸泡，之后放在酒精燈上灼燒滅菌，再放在滅菌后的培養(yǎng)皿中冷卻后使用；③培養(yǎng)瓶外壁的消毒；④將馬鈴薯試管苗剪為單節(jié)莖段后

7、接種到培養(yǎng)基中，在植入材料的前后，培養(yǎng)瓶的瓶口須在酒精燈火焰上燒烤滅菌[3]；⑤封口、標記、將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)架上，在溫度20-25℃，光照強度2000-3000lx[4]，光照時間12-14小時/天的條件下培養(yǎng)。Ⅲ、馬鈴薯試管薯苗的移栽（1）、把培養(yǎng)4-6周的馬鈴薯脫毒試管苗從果醬瓶中取出后用清水清洗干凈培養(yǎng)基[5]，以防止移栽后培養(yǎng)基為細菌、真菌等提供良好的生活環(huán)境，抑制馬鈴薯脫毒苗的生長。（2）、翻地移栽，澆好水后蓋上遮陰網(wǎng)，注意澆水管理。注意事項（1）、在進行實驗前要進行認真的消毒，在實驗過程中注

8、意無菌操作的要點。（2）、扦插的無菌馬鈴薯苗要適當?shù)纳疃龋灰^深也不要過淺。（3）、在單節(jié)莖段繁殖過程采用的是光照培養(yǎng)，在微型薯的誘導是在黑暗條件下培養(yǎng)的。（4）、接種時注意傾斜瓶口，以免帶入病菌，引起污染。（5）、單節(jié)莖插在培養(yǎng)基中應保證固定，接種時切勿倒插馬鈴薯的單節(jié)莖[6]，若不小心倒插，單節(jié)莖短期內(nèi)雖不會死亡，但因違背了植物的生理性極性，因此不會生根。（6）、每瓶單節(jié)莖的數(shù)目與控制一定的數(shù)目約10-20個不要過多或過少。（7）、在