培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)

《培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞工物沖作者：未知實(shí)驗(yàn)頻道來源：木站原創(chuàng)點(diǎn)擊數(shù)：401更新時(shí)間：2004-12-21一、體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化1、差異:細(xì)胞離體后,失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間的相互影響,生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡的相對(duì)穩(wěn)定環(huán)境中，日久天長,易發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時(shí)間后衰退死亡；或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性，變成可無限生長的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。因此，培養(yǎng)中的細(xì)胞可視為一種在特定的條件下的細(xì)胞群體，它們既保持著與體內(nèi)細(xì)胞相同的基木結(jié)構(gòu)和功能，也冇一些不同于體內(nèi)細(xì)胞的性狀。實(shí)際上從細(xì)胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開始發(fā)生了。雖然體外細(xì)胞與機(jī)體細(xì)胞存有差異，但并未失去研究

2、的慮義。且不論其有許多性狀仍與體內(nèi)相同（如體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞仍可轉(zhuǎn)動(dòng)），只從細(xì)胞遺傳學(xué)（Cyto-genetics）的介度看，離體細(xì)胞仍帶有全套的二倍體基因。細(xì)胞在培養(yǎng)中的表現(xiàn)，只不過是和應(yīng)基因關(guān)閉/開啟引起的現(xiàn)象，這并非是絕對(duì)缺陷。恰恰相反，在培養(yǎng)的細(xì)胞中某些特定功能的喪失，可為該基因的表達(dá)與調(diào)控提供線索。2、分化；體外培養(yǎng)的細(xì)胞分化能力并未完全喪失，只是環(huán)境的政變，細(xì)胞分化的表現(xiàn)和在體內(nèi)不同。細(xì)胞是否表現(xiàn)分化關(guān)鍵在于是否存在使細(xì)胞分化的條件，如Friend細(xì)胞（小鼠紅白血病細(xì)胞）在一定的因索作用下可以合成血紅蛋白，血管內(nèi)皮細(xì)胞在類似基膜物質(zhì)底物上培養(yǎng)時(shí)能長成血管狀結(jié)構(gòu)，雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特

3、異的單克隆抗體，這些均屬于細(xì)胞分化行為。二、體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型（-）貼附型：大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長，屬于貼儲(chǔ)依賴性細(xì)胞，判斷細(xì)胞形態(tài)時(shí)不能接體內(nèi)組織學(xué)標(biāo)推判定，僅大致分成以下四型：1、成纖維細(xì)胞熨：胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵闘形核，胞質(zhì)突起，生長時(shí)呈放射狀。除真正的成纖維細(xì)胞外，凡山中胚層間充質(zhì)起源的組織，如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀態(tài)。另外，凡培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維類似時(shí)皆可稱之為成纖維細(xì)胞。2、上皮型細(xì)胞：細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多角形，中央有圓形核，細(xì)胞彼此緊密相連成單層膜。生長時(shí)呈膜狀移動(dòng)，處丁?膜邊緣的細(xì)胞總與膜相連，很少單獨(dú)行動(dòng)。起源于內(nèi)、外胚層的細(xì)胞如皮膚表

4、皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態(tài)。3、游走細(xì)胞烈：呈散在生長，一般不連成片，胞質(zhì)常突起，呈活躍游走或變形運(yùn)動(dòng)，方向不規(guī)則。此烈細(xì)胞不穩(wěn)定，有時(shí)難以和其他細(xì)胞相區(qū)別。4、多型細(xì)胞型：有一些細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。（二）懸浮型；見于少數(shù)特殊的細(xì)胞,如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形,不貼于支持物上,呈懸浮生長。這類細(xì)胞容易大量繁殖。三、培養(yǎng)細(xì)胞的生長和增殖過程體內(nèi)細(xì)胞生長在動(dòng)態(tài)平衡環(huán)境中,而組織培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、皿或其它容器，生存空間和營養(yǎng)是有限的。當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后，則需要分離出一部分細(xì)胞和更新營養(yǎng)液，否則將影響細(xì)

5、胞的繼續(xù)生存，這一過程叫傳代（Passage或Subculture）。毎次傳代以后，細(xì)胞的生長和增殖過程都會(huì)受一定的影響。另外，很多細(xì)胞特別是正常細(xì)胞，在體外的生存也不是無限的，存在著一個(gè)發(fā)展過程。所有這一切，使組織細(xì)胞在培養(yǎng)中有著一系列與體內(nèi)不同的生存特點(diǎn)。(一)培養(yǎng)細(xì)胞生命期(LifeSpanofCultureCells)所謂培養(yǎng)細(xì)胞生命期，是指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)増殖和生長的時(shí)間。體內(nèi)組織細(xì)胞的生存期與完整機(jī)體的死亡衰老基本相一致。組織和細(xì)胞在培養(yǎng)中生命期如何？這耍看細(xì)胞的種類、性狀和原供體的年齡等情況。人胚二倍體成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，在不凍存和反復(fù)傳代條件下，可傳30?5()代，和當(dāng)于150?

6、300個(gè)細(xì)胞増殖周期，能維待一年左右的雄奔洌詈笏歹系蜘狒'popwsis)。如供體為成體或衰老個(gè)體，則生存時(shí)間較短；如培養(yǎng)的為其它細(xì)胞如肝細(xì)胞或腎細(xì)胞，生存時(shí)間更短，僅能傳幾代或十幾代。只有當(dāng)細(xì)胞發(fā)生遺傳性改變，如獲永生性或惡性轉(zhuǎn)化時(shí)，細(xì)胞的生存期才可能發(fā)生改變。對(duì)此以后將詳述。正常細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，不論細(xì)胞的種類和供體的年齡如何，在細(xì)胞全生存過程屮，大致都經(jīng)歷以下三個(gè)階段：1?原代培養(yǎng)(PrimaryCulture)期：也稱初代培養(yǎng)，即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段，一般持續(xù)1一4周。此期細(xì)胞呈活躍的移動(dòng)，可見細(xì)胞分裂，但不旺盛。初代培養(yǎng)細(xì)胞與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上相似性大。細(xì)

7、胞群是異質(zhì)的(Heterogeneous),也即各細(xì)胞的遺傳性狀互不相同，細(xì)胞相互依存性強(qiáng)。如把這種細(xì)胞群稀釋分散成單細(xì)胞，在軟瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞克隆形成率(CloningEfficiency)很低，即細(xì)胞獨(dú)立生存性差?？寺⌒纬陕始醇?xì)胞群被稀釋分散成單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，形成細(xì)胞小群(克隆)的百分?jǐn)?shù)。初代培養(yǎng)細(xì)胞多呈二倍體核型；由于原代培養(yǎng)細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞性狀相似性人，是檢測(cè)藥物很好的實(shí)驗(yàn)對(duì)彖。2.傳代