分子診斷學(xué)筆記

《分子診斷學(xué)筆記》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、[1]原核生物基因組原核生物主要包括、細(xì)菌、支原體、立克次體、衣原體、螺旋體、放線菌、藍(lán)綠藻等有關(guān)質(zhì)粒按質(zhì)粒的功能分類：致育質(zhì)粒F質(zhì)粒）編碼性菌毛，介導(dǎo)細(xì)菌Z間的接合傳遞；耐藥性質(zhì)粒R質(zhì)粒）編碼細(xì)菌對(duì)抗菌藥物或巫金屬鹽類的耐藥性；毎力質(zhì)粒Vi質(zhì)粒）編碼與該菌致病性有關(guān)的毎力因子；細(xì)菌素質(zhì)粒編碼細(xì)菌產(chǎn)生細(xì)菌素；代謝質(zhì)粒編碼產(chǎn)牛:相關(guān)的代謝酶。按復(fù)制機(jī)制分類：1、嚴(yán)緊控制型拷貝數(shù)少，一般〈10個(gè)，分子量大；調(diào)節(jié)因子是蛋白質(zhì)，復(fù)制受限，受染色體IKA復(fù)制系統(tǒng)的控制；嚴(yán)謹(jǐn)控制機(jī)理（低拷貝原因），認(rèn)為是該質(zhì)粒可以產(chǎn)生阻遏蛋白

2、，反饋抑制￡1身DNA合成。2、松弛控制型拷貝數(shù)多，10-200個(gè)，分子量??；調(diào)節(jié)因子是RNA,復(fù)制不受染色體DNA復(fù)制系統(tǒng)限制基因T程使用松弛型（高拷貝數(shù)）質(zhì)粒，以獲得較多的基因產(chǎn)物。性質(zhì)：1、轉(zhuǎn)移性：可以通過轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或接合作用而由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞中，使兩個(gè)細(xì)胞都成為帶有質(zhì)粒的細(xì)胞；質(zhì)粒轉(zhuǎn)移時(shí)，它可以單獨(dú)轉(zhuǎn)移，也可以攜帶著染色體（片段）一起進(jìn)行轉(zhuǎn)移，所以它可成為基因工程的載體。2、質(zhì)粒具有選擇性標(biāo)記：質(zhì)粒有抗藥性基I人1、營養(yǎng)缺陷型基因、抗重金屈鹽基因等多種選樣性標(biāo)記；3、質(zhì)粒的不相容性：同一類

3、群的不同質(zhì)粒-?般不能在同一菌株內(nèi)穩(wěn)圧共存；4、自主復(fù)制性：能獨(dú)立于宿主染色體DNA外獨(dú)立復(fù)制（但也必須在宿主細(xì)胞內(nèi)才能復(fù)制）；質(zhì)粒己成為分子克隆的有用工具，是目的DNA的載體。載體質(zhì)粒人多是在天然質(zhì)?；A(chǔ)上經(jīng)人工構(gòu)建而成，質(zhì)粒的一些特點(diǎn)：1、有限制性核酸內(nèi)切酶單一切口，可用以重紐外源DNA；2、有篩選標(biāo)記，如抗藥基因等；3、插入外源DNA后，仍能轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，并能復(fù)制。質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)移的方式：1、接合作用當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞、或細(xì)菌通過菌毛相互接觸時(shí)，質(zhì)粒DA從一個(gè)細(xì)胞（細(xì)菌）轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞（細(xì)菌）的DNA轉(zhuǎn)移稱為接合作用

4、2、轉(zhuǎn)化作用通過自動(dòng)獲取或人為地供給外源DM,使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型，稱為轉(zhuǎn)化作用3、轉(zhuǎn)導(dǎo)作用當(dāng)病毒從被感染的（供體）細(xì)胞釋放出來、再次感染另一（受體）細(xì)胞時(shí)，發(fā)生在供體細(xì)胞與受體細(xì)胞Z間的DNA轉(zhuǎn)移及基因重組即為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用4、轉(zhuǎn)染作用通過感染方式將外來DNA引入宿主細(xì)胞，并導(dǎo)致宿主細(xì)胞遺傳性狀改變的過程稱為轉(zhuǎn)染（transfection）。轉(zhuǎn)染是轉(zhuǎn)化的一種特殊形式。完整的病毒顆粒包括：衣殼、基因組（DNA或RA）、被膜、病毒顆粒中的其他內(nèi)容物病毒分段基因組：流感病毒屬分段R7A病毒意義：a）降低包

5、裝壓力b）降低了造成斷裂的可能性，提高編碼能力c）有分段基因組的病毒一般感染效率較低，只有全部基因組核酸片段存在時(shí)，病毒才具有感染能力。植物病毒d）由于分段基因組易發(fā)生重組，故病莓容易變異。病毒基因紐?特點(diǎn):1、5'的帽子和3，的poly（A）尾結(jié)構(gòu)2、末端重復(fù)序列結(jié)果：粘性末段、止/反向互補(bǔ)序列、長末端重復(fù)序列；3、高效基因組：排列緊密很少間隔區(qū)，不僅非編碼用列少，而且冇重蔭基因的存在;4、分段基因組:易重組,是病毒易變異的原因。真核生物基因組染色體的包裝：（1）染色體的一級(jí)結(jié)構(gòu)一核小體（2）染色體的二級(jí)結(jié)構(gòu)一螺

6、線管（3）染色體的三級(jí)結(jié)構(gòu)一超螺線管（4）染色體的四級(jí)結(jié)構(gòu)一染色單體真核生物染色體基因組一般特征1、真核生物的基因組比餃龐大；2、線性雙鏈DNA和二倍體；3、真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。4、存在重復(fù)序列，覓復(fù)次數(shù)可達(dá)百萬次以上5、基因是不連續(xù)的（斷裂基因）重復(fù)序列：指多拷貝的相同或近似序列的DNA片段一、高度重復(fù)序列，按其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)分為三種：1、反向重復(fù)序列2、衛(wèi)星DNA山于這類用列的堿基組成不同于具他部份，可用等密度梯度離心法將具巧主體DNA分開，I大I而稱為衛(wèi)星DMA（或隨體DNA）3、較復(fù)雜的重復(fù)單位組成的

7、重復(fù)順序二、中度重復(fù)順序:依據(jù)重復(fù)順序的長度，中度重復(fù)順序可分為：短散布元件和氏散布元件Alu家族：是哺乳動(dòng)物基因組屮含量最豐富的一種屮度重復(fù)順序家族（短分散元件），Alu家族毎個(gè)成員的長度約300bp,每個(gè)單位長度屮有一個(gè)限制性內(nèi)切酶AluI的切點(diǎn)（AGICT）,Alu可將其切成長130和170bp的兩段，因而定名為Alu序列（或Alu家族）線粒體DNA的遺傳特性：母系遺傳、突變率高、異質(zhì)性、閾值效應(yīng)、半自助復(fù)制與協(xié)同效應(yīng)閾值效應(yīng)：mtDNA突變導(dǎo)致氧化磷酸化水平降低，半突變的mtDNA達(dá)到一定比例時(shí)，使得線粒體

8、總的能量供應(yīng)降低到維持組織止常功能所需能量的最低值時(shí)，才可能引起某組織或器官的功能異常而出現(xiàn)臨床癥狀。DNA分子多態(tài)性的主耍方式：微衛(wèi)星DNA多態(tài)性（同一位點(diǎn)不同個(gè)體之間有不同長度的微衛(wèi)星DNA,STR）、單個(gè)核昔酸的變界一單核昔酸多態(tài)性（SNP）等1、微衛(wèi)星DNA乂稱短串聯(lián)覓復(fù)STR,指以1—6個(gè)堿皋為核心單位串聯(lián)重復(fù)血成的一類序列。微衛(wèi)星DNA結(jié)構(gòu)用列山