分子診斷學(xué)重點(diǎn)1

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1、分子診斷：應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測(cè)患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平的變化而做出診斷的技術(shù)，稱為分子診斷。分子診斷學(xué)：是臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)的一個(gè)重要分支，它利用分子生物學(xué)技術(shù)來研究機(jī)體外源性和內(nèi)源性生物大分子和大分子體系的存在、結(jié)構(gòu)或表達(dá)調(diào)控的改變，從而為疾病的預(yù)測(cè)、預(yù)防、診治和轉(zhuǎn)歸提供分子水平信息。基因：基因是一段攜帶功能產(chǎn)物（多肽、蛋白質(zhì)、tRNA.iRNA和某些小分子RNA）信息的片段基因組：是指生物體的一套完解的單倍體遺傳信息，包括所冇基因和基因間的區(qū)域?；蚪M學(xué)：指對(duì)所有基因進(jìn)行基因組作圖（包括遺傳圖譜、物理圖譜、轉(zhuǎn)錄圖譜）、核卄酸序列分析、基

2、因定位和基因功能分析的一門科學(xué)。人類基因組多樣性：即人類基因組的個(gè)體差界。生物大分子：指分子體內(nèi)由分子量較低的基木結(jié)構(gòu)單位首位相連形成的多聚化合物。CsCl-EB密度梯度超速離心法：CsCl-EB法是一種沉降平衡離心法，經(jīng)超速離心，離心介質(zhì)CsCl形成一連續(xù)的密度梯度，在過量EB存在的條件下，各種不同密度的物質(zhì)經(jīng)離心平衡后得以分開。（CsCl-EB法分離質(zhì)粒和染色體DNA就取決于澳化乙錠與線狀及閉環(huán)DNA分子的結(jié)合量有所不同）。Western印跡：蛋白質(zhì)印跡，又稱免疫卬跡，是一種通過標(biāo)記的抗體檢測(cè)經(jīng)SDS-PAGE分離的特定蛋白質(zhì)的技術(shù)。克隆載體

3、：能攜帶目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的一類DNA分子，用于在宿主細(xì)胞中克隆和擴(kuò)增外援DNA片段表達(dá)載體：能攜帶H的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的一類DNA分子，用于在宿主細(xì)胞中獲得外援基因的表達(dá)產(chǎn)物。重組DNA技術(shù)：是指在基因水平上，將目的DNA在體外巫組于能自我復(fù)制的載體DNA分子上，然后將重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞中進(jìn)行增生，以獲得大戢的目的DNA片段，或以此為基礎(chǔ)，通過基因的誘導(dǎo)衣達(dá)，得到人量相應(yīng)蛋白質(zhì)產(chǎn)物的過程。基因組文庫(kù)：將某種生物的基因組DNA切割成一定大小的片段，并與合適的載體重組后導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行克隆。這些存在于所有重組體內(nèi)的

4、基因組DNA片段的集合，即基因組文庫(kù)，它包含了該生物的所冇基因。CDNA文庫(kù)：提取組織細(xì)胞的mRNA,逆轉(zhuǎn)錄成Cdna,與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞，得到含重組DNA的噬菌體或細(xì)菌克隆，從而構(gòu)建成某種生物的cDNA文庫(kù)?；蚬こ?乂稱某因拼接技術(shù)和DNA重組技術(shù)，是以分子遺傳學(xué)為理論某礎(chǔ),以分子牛物學(xué)利微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段,將不同來源的基因（DNA分子），按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子,然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以改變生物原冇的遺傳特性、獲得新品種、生產(chǎn)新產(chǎn)品PCR即聚合酶鏈反應(yīng)，是利用DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）等在體外條件下，催

5、化一對(duì)引物間的特異DNA片斷合成的基因體外擴(kuò)增技術(shù)。核酸分子雜交：不同來源的單鏈核酸分了在適合的溫度和離了強(qiáng)度下，通過堿基互補(bǔ)形成雙鏈雜交體的過程生物芯片：是采用類似集成電路制作中的微加工技術(shù)，將生命科學(xué)硏究中的若干不連續(xù)過程集成到一塊幾平方厘米人小的芯片上，并使這些分散的過程連續(xù)化與微型化，以此來實(shí)現(xiàn)對(duì)人量生物樣品中各數(shù)據(jù)的快速自動(dòng)和并行處理?；蛐酒簩⒋罅康幕蚱斡行虻?，高密度的排列在玻璃片或纖維膜等載體上，稱Z為基因芯片。第二章1分子診斷的主要特點(diǎn)是什么？主要特點(diǎn)：直接以疾病基因及其表型為檢測(cè)對(duì)象，特異性高，屬于病因?qū)W診斷，其檢測(cè)結(jié)果不

6、僅具有描述性，且具有準(zhǔn)確預(yù)測(cè)性;分子診斷不僅可準(zhǔn)確診斷有基因表型異常的疾病，更重要的是其可對(duì)疾病基因型的變異作出判斷。2、分子診斷學(xué)經(jīng)歷了哪幾個(gè)發(fā)展階段？每個(gè)階段各有什么特征性技術(shù)得到建立及應(yīng)用？第一階段：主要利用DNA分子雜交方法進(jìn)行遺傳病的基因診斷。第二階段：創(chuàng)建并利用PCR技術(shù)。第三階段：以生物芯片為代表的高通量密集型技術(shù)。4、真核牛?物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)有哪些？與原核比較，主要區(qū)別是什么？真核生物基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1）基因組龐大2）線狀雙鏈DNA和二倍體3）非編碼區(qū)遠(yuǎn)多于編碼區(qū)4）功能基因大多不連續(xù)5）重復(fù)序列與原核的區(qū)別:真核原核基因組大小龐大

7、較小操縱子無廣泛存在DNA線狀雙鏈二倍體環(huán)狀雙鏈基本為單倍體非編碼區(qū)90%以上50%左右內(nèi)含子與外顯子并存無5、真核生物線粒體基因組有何特點(diǎn)？①非孟德爾的母性遺傳②高突變率③異質(zhì)性和復(fù)制分離④閾值效應(yīng)⑤半保留復(fù)制與協(xié)調(diào)作用6、什么是人類基因組多樣性？產(chǎn)生多態(tài)性的方式主要是什么？人類基因組多樣性：即人類基因組的個(gè)體差異。產(chǎn)生的主要方式：（1）重復(fù)序列單元的拷貝數(shù)變異（2）可轉(zhuǎn)座元件導(dǎo)致的分子多態(tài)（3）單個(gè)核苜酸的變異第三章2、酚抽提法制備真核基因組DNA的原理及相關(guān)試劑的作用。酚抽提法：主要利用基因組DNA較長(zhǎng)的特性，將其與細(xì)胞器或質(zhì)粒等小分子DN

8、A分離。首先在含EDTA、SDS及無DNA酶的RNA酶的條件下裂解細(xì)胞，經(jīng)蛋白酶K處理后，用pH8.0的Tris飽和酚抽提DNA,加入一