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《TLR9表達與胃癌臨床病理特征關(guān)系的初步研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、TLR9表達與胃癌臨床病理特征關(guān)系的初步研究作者：馬亞軍1,張艷麗1,崔柳1,李秀萍2作者單位：1?寧夏醫(yī)科大學；2.寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院【摘要】冃的觀察TLR9在胃癌中的表達及其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。方法運用Western-blot方法測定胃癌細胞系MGC8O3TLR9的表達;用不同濃度的TLR9激動劑CpG0DN(2、5、10Mg?mL-l)分別作用于胃癌細胞系MGC803不同吋間(24、48、72h)后，用四甲基偶氮醴鹽微量酶反應比色法(MTT法)檢測細胞生長抑制率;免疫組化SP法檢測30例胃癌組織和15例癌旁組織中TL
2、R9的表達，并分析其與患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果Western-blot法檢測到TLR9在胃癌細胞系MGC803中有表達;2Mg?mL-l和5Mg?mL-lCpGODN僅在作用的72h有抑制胃癌細胞增殖的作用(PvO.Ol),而10Mg?mL-lCpGODN作用24、48h和72h均能顯著抑制該細胞的增殖(PvO.Ol);免疫組化結(jié)杲顯示，在胃癌組織和癌旁組織中均有TLR9的表達，且癌旁組織TLR9的表達高于胃癌組織(PvO.05);高、屮分化組TLR9的表達高于低分化組(P<0.05)沬觀察到TLR9蛋片的表達與患者的性別、
3、年齡、腫瘤大小、部位、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。結(jié)論TLR9在胃癌中有表達，且與腫瘤分化程度有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】CpGODN;TLR9;胃癌胃癌具有發(fā)生率高、侵襲性強的特點，胃癌細胞的生物學行為與臨床病理變化有一定的關(guān)系，但其中涉及的分子機制仍不清楚oToll樣受體(Toll-likereceptors,TLRs)在識別病原相關(guān)分了模式(pathogen-associatedmolecularpatterns,PAMPs)中起重要作用。大量研究已證實，TLRs在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中既可能促進腫瘤生長也可能發(fā)生抗腫瘤效應，并且
4、TLRs的表達與腫瘤的某些臨床病理特征有相關(guān)性，如淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度等。TLR9是否參與胃癌發(fā)生發(fā)展過程，目前詢不清楚。木研究以胃癌細胞系MGC803、胃癌組織及癌旁組織為研究對象，觀察TLR9在胃癌的表達情況及其與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性。1材料和方法1」材料MGC803細胞為木室保存;RPMI1640培養(yǎng)基購自GBICO公司;四甲基偶氮卩坐鹽(MTT)購自Amresco公司;胎牛血清購自民海生物公司;TLR9激動劑CpGODN1826(5,-tccatgacgttcctgacgtt-31,全程硫代修飾)由北京賽百盛
5、生物基因技術(shù)有限公司合成;胃癌組織和癌旁組織均由寧夏醫(yī)科人學總醫(yī)院病理科提供;TLR9抗體購自abeam公司；SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。1.2方法1.2.1Western-blot方法測定胃癌細胞系MGC8O3TLR9的表達培養(yǎng)細胞達到80%?90%以上的融合狀態(tài)時，改用含2%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)。提取腫瘤細胞總蛋口行BCA定量，取40Mg上樣,SDS-PAGE電泳分離蛋白，PVDF膜在60V,300mA,4°C恒流條件下轉(zhuǎn)膜3h,5%脫脂奶粉4。C封閉過復，TBST洗3次，鼠抗人TLR9單克隆抗體1
6、：100的工作濃度下37°C孵育3h,TBST洗3次后用羊抗鼠二抗1：100工作濃度下37°C孵育2h后仍用TBST洗滌，DAB顯色，ECL發(fā)光及曝光，將膠片進行拍照。1.2.1MTT法檢測細胞增殖活性按常規(guī)方法用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，在37°C、5%CO2飽和濕度的孵箱中對胃癌細胞MGC8O3進行培養(yǎng)。選取處于對數(shù)生長期且細胞活性大于98%的細胞進行實驗。調(diào)整細胞濃度為2X107/L加入96孔培養(yǎng)板。實驗分為四組，細胞對照組;加藥組①:2Mg?mL-l的CpGODN組;加藥組②：5Mg?mL-1的CpGO
7、DN組;加藥組③：10Mg?mL-l的CpGODN組，每組各設3個復孔。分別作用24、48h和72h后，終止培養(yǎng)，每孔加入終濃度5Mg?mL-l的MTT10ML,37°C孵育3h后，在酶標儀上測定450nm波長下各孔A值。1.2.3免疫組化SP法檢測胃癌組織和癌旁組織TLR9的表達操作嚴格按SP試劑盒說明書進行。結(jié)果判斷：TLR9以細胞漿和(或)細胞膜呈棕黃色或棕褐色為陽性。400倍光鏡下每張切片隨機取10個高倍視野陽性細胞百分率，最后取兩位病理學專家計算百分率的平均值。以TLR9表達陽性細胞率210%為陽性(+),275%為強
8、陽性(++),<10%為陰性(?)。1.3統(tǒng)計學方法全部數(shù)據(jù)采用SPSS11.5處理，計數(shù)資料以百分率表示，采用X2檢驗或Fisher確切概率法;計量資料的組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2」TLR9在胃癌細胞MGC803的表達West
