乙肝病毒核酸定量檢測(cè)臨床價(jià)值

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1、乙肝病毒核酸定量檢測(cè)臨床價(jià)值乙肝病毒核酸定量測(cè)定的臨床價(jià)值賈中華1謝愛(ài)國(guó)2陳素花31,2江西省高安市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科3江西省高安市灰埠中心衛(wèi)生院［摘要］目的:研究乙型肝炎患者HBV-DNA定量檢測(cè)與血清學(xué)免疫標(biāo)志物及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平之間的關(guān)系?方法:用熒光定量PCR法檢測(cè)326份乙肝表面抗原陽(yáng)性標(biāo)本中的HBV?DNA,同時(shí)檢測(cè)血清免疫標(biāo)志物和ALT?結(jié)果:326例乙肝表面抗原攜帶標(biāo)本中HBV?DNA定量高于103拷貝/ml血清有213例‘陽(yáng)性率為65.34%(213/326),ALT異常率為37.42%(122/

2、326).113例乙肝表面抗原陽(yáng)性、HBV?DNA定量低于103拷貝/ml標(biāo)本中小三陽(yáng)67例，占59.29%(67/113),HBsAg、抗?HBc陽(yáng)性31例‘占24.73%(31/113),其它15例，占13.27%(15/113).ALT異常率6.19%.結(jié)論：HBV-DNA檢測(cè)低于檢測(cè)線下限并不代表體內(nèi)HBV?DNA已被完全清除，結(jié)合其它血清學(xué)免疫指標(biāo)和生化學(xué)指標(biāo)更能客觀反映體內(nèi)HBV病毒狀態(tài)，正確判斷預(yù)后和治療.［關(guān)鍵詞］乙型肝炎;乙肝病毒核酸(HBV-DNA);熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)(FQ-PCR);丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶

3、(ALT)1材料與方法1.1對(duì)象2006年8月本院門(mén)診和住院部乙肝病毒表面抗原攜帶者326例，年齡3-80歲，平均25.80歲?男性231例，女性95例.1.2方法1.2.1HBV-DNA檢測(cè)采用杭州博日公司的line-gene檢測(cè)分析系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)?試劑盒采用廣州中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司的乙型肝炎病毒(HBV)核酸擴(kuò)增(PCR)熒光定量檢測(cè)試劑盒?檢測(cè)步驟按試劑盒使用說(shuō)明書(shū).分別設(shè)陰性質(zhì)控品，陽(yáng)性質(zhì)控品，空白對(duì)照以及陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品梯度?檢測(cè)結(jié)果＞10拷貝/ml判斷為陽(yáng)性,否則為低于檢測(cè)線下限.1

4、.2.2HBV血清學(xué)免疫標(biāo)志物檢測(cè)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)HBsAg,抗?HBs,HBeA匕抗?HBe,抗?HBc共5個(gè)項(xiàng)目?采用華美生物工程公司的乙型肝炎診斷試劑盒，測(cè)定步驟參照說(shuō)明書(shū).分別設(shè)陰性，陽(yáng)性，空白對(duì)照，用酶標(biāo)儀讀數(shù)，樣品OD值上陰性對(duì)照平均OD值X2.1判斷為陽(yáng)性,否則為陰性.1.2.3ALT檢測(cè)采用生化自動(dòng)分析儀檢測(cè)'正常值V40U/L.1.2.4資料統(tǒng)計(jì)采用excel2000軟件進(jìn)行處理.2結(jié)果2.1326例乙肝表面抗原攜帶標(biāo)本中HBV?DNA定量高于103拷貝/ml血清冇213例”陽(yáng)性率為65.34

5、%(213/326),ALT異常率為37.42%(122/326).113例乙肝表面抗原陽(yáng)、HBV?DNA定量低于103拷貝/ml標(biāo)本中小三陽(yáng)67例，占59.29%(67/113),HBsAg、抗?HBc陽(yáng)性31例‘占24.73%(31/113),其它15例，占13.27%(15/113).ALT異常率6.19%.2.2HBV-DNA定量與血清學(xué)免疫標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果比較見(jiàn)表12.1HBV-DNA定量與ALT異常率比較見(jiàn)表23表1326份標(biāo)本HBV?DNA定量與血清學(xué)免疫標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果實(shí)時(shí)熒光定量PCR是目前臨床檢測(cè)血清HBV?

6、DNA常用的分子牛物學(xué)方法?木系統(tǒng)充分利用了Taqman酶獨(dú)特的生物學(xué)活性和熒光激活、淬滅性質(zhì),合成了分別攜有熒光集團(tuán)和淬滅集團(tuán)近距引物、探針，在循環(huán)進(jìn)行屮即可檢測(cè)熒光強(qiáng)度并用軟件與內(nèi)參比進(jìn)行定量分析?由于無(wú)需開(kāi)蓋檢測(cè)PCR產(chǎn)物,避免了以往傳統(tǒng)PCR易產(chǎn)生假陽(yáng)性污染物的缺點(diǎn)?檢測(cè)重復(fù)性好，而且實(shí)時(shí)熒光定量PCR還解決了抗病毒藥物療效觀察的一大難題.326份乙肝表面抗原攜帶標(biāo)本中HBV?DNA定量高于103拷貝/ml血清有213例，陽(yáng)性率為65.34%(213/326),ALT異常率為37.42%(122/326).其中，大三

7、陽(yáng)86例,陽(yáng)性率100%(86/86),小三陽(yáng)76例,陽(yáng)性率53.15%(76/143),HBsAg、抗?HBc陽(yáng)性率為60.27%(47/78),其它情況陽(yáng)性率25.00%(5/20).本文屮113例乙肝表面抗原陽(yáng)性、HBV-DNA定量低于103拷貝/ml標(biāo)本屮小三陽(yáng)67例，占59.29%(67/113)zHBsAg＞抗?HBc陽(yáng)性31例'占24.73%(31/113),其它15例，占13.27%(15/113).ALT異常率6.29%?可能是由于這些病例經(jīng)過(guò)抗病毒治療，使病毒復(fù)制減弱或停止，從而檢測(cè)結(jié)果低于檢測(cè)線下限.血

8、清HBV?DNA熒光定量PCR測(cè)定可以直接反映病毒復(fù)制狀態(tài),具冇很多臨床價(jià)值，但[2]檢測(cè)費(fèi)用較高⑴、，而且不能完全反映病毒復(fù)制靜息期肝細(xì)胞內(nèi)HBV病毒狀態(tài)ZHBV-DNA檢測(cè)低于檢測(cè)線下限并不代表體內(nèi)HBV?DNA己被完全清除，結(jié)合其它血清學(xué)免疫指標(biāo)和生化學(xué)指標(biāo)更能客觀反映體內(nèi)HBV病毒