白僵菌侵染試驗(yàn)

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1、白僵菌侵染黃粉蟲(chóng)試驗(yàn)李益1、目的要求2、白僵菌的基本特征3、侵染過(guò)程4、實(shí)驗(yàn)用具和材料5、實(shí)驗(yàn)步驟6、作業(yè)1、目的要求基本了解白僵菌的基本特征和侵染過(guò)程，并學(xué)習(xí)掌握白僵菌的毒力測(cè)定方法，比較不同白僵菌的不同濃度毒力大小。2、白僵菌的基本特征白僵菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)比較研究，白僵菌在25℃恒溫箱中培養(yǎng)10d的菌落直徑達(dá)到2.0～2．9cm，絨狀至粉狀；初為白色，稍后或變成微黃色、微紅色；背面微黃色。分生孢子梗單生或輪生，后形成產(chǎn)孢細(xì)胞后者多為球形，有時(shí)呈瓶狀的圓柱形，彎曲或正直，其頂端延伸變細(xì)且彎曲而呈“之”字形的纖維狀。在彎曲處長(zhǎng)出很短的小梗其

2、上產(chǎn)生分生孢子。3、侵染過(guò)程a、分生孢子附著在寄主的表皮上（7h）；b、大量分生孢子萌發(fā)產(chǎn)生芽管和附著胞(22h)；c、菌體穿透到寄主表皮層中（28h），伴隨著組織溶解（酶的機(jī)制），在穿透菌絲的附近，寄主表皮層的片層結(jié)構(gòu)發(fā)生變形（機(jī)械性）；d、菌絲在表皮層內(nèi)常平行于片層結(jié)構(gòu)延伸，形成穿透菌絲；e、菌體從表皮層進(jìn)入到皮細(xì)胞層中，隨后進(jìn)入血腔，并在血腔內(nèi)大量增殖，寄主組織逐漸解體；f、在寄主死體內(nèi)產(chǎn)生有活力的孢子，并可再侵染分生孢子附著在寄主表皮上（7h）大量分生孢子萌發(fā)產(chǎn)生芽管和附著胞(22h)菌體穿透到寄主表皮層中（28h），菌體從表皮

3、層進(jìn)入到皮細(xì)胞層中，隨后進(jìn)入血腔并在血腔內(nèi)大量增殖，寄主組織逐漸解體在寄主死體內(nèi)產(chǎn)生有活力的孢子，并可再侵染3、侵染過(guò)程4、實(shí)驗(yàn)用具和材料實(shí)驗(yàn)用具：滅菌培養(yǎng)皿、滅菌濾紙、無(wú)菌水、滅菌試管、滅菌鑷子、微量移液槍、顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)材料：白僵菌（Beauveriabassiana）Bb-10-12、成品白僵菌、0.1%吐溫80濕潤(rùn)劑的0.003mol/LKH2PO4緩沖液。5、試驗(yàn)步驟1、將-4℃保存的白僵菌25±1℃、相對(duì)濕度80%±10%下用PDA培養(yǎng)基擴(kuò)繁培養(yǎng)7天左右。2、帶完全產(chǎn)孢后，用含0.1%吐溫80濕潤(rùn)劑的0.003mo

4、l/LKH2PO4緩沖液將分生孢子粉濕潤(rùn)、洗脫，磁力攪拌器攪拌混勻，并過(guò)濾除去菌絲和雜質(zhì)。3、用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)孢子數(shù)，測(cè)出其濃度，再用無(wú)菌水分別稀釋成孢子濃度梯度為109、108個(gè)/mL的懸浮液備用。4、采用浸漬法將黃粉蟲(chóng)蟲(chóng)體浸入孢子懸浮液中1秒，對(duì)照組浸漬無(wú)菌水處理。5、浸漬后放于滅菌濾紙上爬行盡快吸干其身上多余的懸浮液，吸干后把試蟲(chóng)放入培養(yǎng)皿中，（25±1）℃、相對(duì)濕度80%±10%飼養(yǎng)。6、每個(gè)處理濃度3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5頭（2個(gè)濃度用蟲(chóng)）。7、施藥后每3d記錄一次死蟲(chóng)數(shù)，連續(xù)調(diào)查5次。將死蟲(chóng)挑出保濕培養(yǎng)，記錄僵蟲(chóng)數(shù)。8

5、、結(jié)果統(tǒng)計(jì)：毒力結(jié)果記錄表藥劑濃度（個(gè)孢子/mL）試蟲(chóng)數(shù)(頭)施藥后3天施藥后6天施藥后9天施藥后12天施藥后15天死亡率（%）校正死亡率（%）死亡率（%）校正死亡率（%）死亡率（%）校正死亡率（%）死亡率（%）校正死亡率（%）死亡率（%）校正死亡率（%）Bb-10-121091510815成品白僵菌1091510815對(duì)照無(wú)菌水15將算出各處理（濃度）的校正死亡率換算成機(jī)率值，并與時(shí)間算出致死中時(shí)間（LD50）。6、作業(yè)1、將實(shí)驗(yàn)結(jié)果整理寫(xiě)在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。2、白僵菌有什么特點(diǎn)，侵染機(jī)理是什么？被白僵菌侵染后試蟲(chóng)有什么癥狀？3、用浸漬法進(jìn)

6、行白僵菌毒力測(cè)定實(shí)驗(yàn)，毒力大小是以什么方法進(jìn)行評(píng)定？4、并結(jié)合自己所學(xué)知識(shí)說(shuō)說(shuō)真菌藥劑和化學(xué)藥劑有什么不同？