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《豬支原體肺炎環(huán)介導等溫擴增診斷方法的建立》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、豬肺炎支原體環(huán)介導等溫擴增診斷方法的建立李鵬J馬艷嬌薛曉萌S劉叢-夏偉I1、黑龍江八一農星大學動物科技學院,黑龍江大慶1633192、訥河市畜牧水產推廣屮心,黑龍江訥河161300摘要：目的：建立臨床診斷豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae)的新方法。方法：根據GenBank上發(fā)表的豬肺炎支原體的核昔酸序列，針對該核昔酸序列設計4條特異性引物，其外引物擴增片段大小為276bp,通過對內外引物的比例、dNTP-濃度、Mg2+濃度和BstDNA聚合酶用量等條件逐一優(yōu)化后，成功建立了豬支原體環(huán)介導等溫擴增方法(LAMP)o結果：LAMP方法在恒溫60C條件下lh特異
2、性較強，其敏感性為當其豬肺炎支原體的拷貝數(shù)低于為3?6時，不能檢測到該病原體。且試驗中檢測到多殺性巴氏桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、肺炎雙球菌、支氣管敗血波氏桿菌、副豬嗜血桿菌和鏈球菌均呈陰性。討論:環(huán)介導等溫擴增方法診斷豬肺炎支原體具有很好的敏感性和特異性.關鍵詞：豬帥炎支原體；環(huán)介導等溫擴增；診斷DevelopmentofLoop-MediatedIsothermalAmplificationMethod(LAMP)forthedetectionofswineMycoplasmahyopneumoniaeAbstract:Object:ThenewmethodofMycoplasma
3、hyopneumoniacwassetupinourexperimenl?Method:Thetwopairsofthespecificprimesweredesigned,accordingtothenucleotidesequenceofMhwaspublishedbyGenBank?Thefragmentwasamplifiedbytheexternalprimers?TheLAMPmethodofswineMhwassuccessfullysetup,afteroptimizationoftheconcentrationoflheinternalandexternalprim
4、ers、dNTP"、Mg**andthevolumeofBstDNApolymerase?Result:TheresultwasthattheLAMPmethodwasmorespecificandsensitiveunderthe60°C、60min.YetthedetectionoftheamplificationwerenegativeforPastcure!lamu!toeida、Actinobaci11us>Streptococcuspneumoniae^Bordetellabronchi、Haemophi1usparasuisandStreptococcus.Discus
5、s:Sothemethodhadwe11Sensitivityandspecificity.Keyword:Mycoplasmahyopneumoni日e;LAMP;diagnosis豬氣喘病乂稱為豬支原體肺炎(Mycoplasmahyopneumoniae),它是由肺炎支原體引起的一種慢性接觸性呼吸道傳染?。?］。支原體可通過空氣傳染，很難隔離和阻斷傳播途徑，且豬群的感染率很高，本病發(fā)病率高、且流行很快，并在逐年上升，在全世界流行十分廣泛，焰危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴重的疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重經濟損失［2］。目前豬支原體體外分離培養(yǎng)和鑒定具有一定的困難，所以在發(fā)展中國家及我國臨床條件收稿日期：
6、；修回日期：基金項目:大慶市科學技術局項目(SGG2007-048)通訊作者：李鵬(1971—),男，山東，副教授，博士，研究方向：生物化學與分子生物學。通信地址：黑龍江八-?農星大學動物科技學院李鵬(收)Tel:13836962800E-mail：lipeng98@163.com有限的地區(qū)建立一種簡也、快速的診斷方法就尤為垂要，雖然現(xiàn)在該病有很多診斷方法，但是都需要較髙的實驗室條件，因此在臨床上建立一種簡單、快速的診斷方法具有重要實踐意義⑶。2000年，Notomi等捉出的一種新的核酸擴增技術——環(huán)介導等溫擴增(LAMP),它是一種通過設計四條特異性引物來鑒定目的基因的方法，而且它
7、還是一?種快速、簡便、準確和廉價的基］大I擴增法，在全世界很多發(fā)展中國家和臨床條件有限的地方被廣泛的應用，本研究主要建立豬肺炎支原體LAMP診斷方法［4-6］o1材料和方法1.1菌株及培養(yǎng)豬肺炎支原休、多殺性巴氏桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、肺炎雙球菌、支氣管敗血波氏桿菌、副豬嗜血桿菌和鏈球菌為本實驗室保存。1.2主要試劑BstDNA聚合酶購自NEB生物技術有限公司；LAtaq酶、dNTPSDNAMarker2000、PMD18-T載體購自人連寶生物工程冇限公
