杜仲內(nèi)生真菌的分離及其鑒定

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1、杜仲內(nèi)生真菌的分離及其鑒定摘要：從杜仲的根、莖、葉中分離得到80株內(nèi)生真菌,經(jīng)顯微形態(tài)特征觀察鑒定為14個(gè)屬，其中根部33株涉及10個(gè)屬，莖部26株涉及9個(gè)屬，葉部21株涉及6個(gè)屬。結(jié)果表明，杜仲的不同部位內(nèi)生真菌的數(shù)量、分布和種群存有差異。關(guān)鍵詞：內(nèi)生真菌；分離；鑒定；杜仲中圖分類號(hào)：Q93-33,S567?1+9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：0439-811404-0731-03IsolationandldentificationofEndophyticFungifromEucommiau1moidesSUNKui1,Abstract：Eightysofendo

2、phyticfungitedto14genuswereisolatedandmorphologicallyidentifiedfromtheroots,stemsandleavesofEucommiau1moidesOliv..Amongthem,33strainsof10generawereobtainedfromroots,26strainsof9generafromstems,and21strainsof6generafrom1eaves.Theresu1tsshowedthefactsthatthequantity,population,anddist

3、ributionoftheendophyticfungiwerevariedindifferenttissuesofEucommiau1moides?Keywords：endophyticfungi；isolation；identification；Eucommiau1moidesOliv.杜仲是我國(guó)獨(dú)有的杜仲科杜仲屬中的單種植物，具有降壓、消炎、防癌抗癌等多種藥用功效。杜仲全身是寶，經(jīng)濟(jì)價(jià)值極高[1]o近年來(lái)，杜仲研究、開(kāi)發(fā)取得了突破性進(jìn)展，更使其身價(jià)倍增。目前這一重要的藥用植物在利用上一方面已出現(xiàn)野生資源匱乏、藥材供應(yīng)不足的問(wèn)題，另一方面其產(chǎn)品開(kāi)發(fā)與活性物

4、質(zhì)提取的研究又較活躍，故尋找類似的替代資源受到關(guān)注［2］。自發(fā)現(xiàn)了能夠產(chǎn)生紫杉醇的內(nèi)生真菌以來(lái)，植物內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生與宿主相同或相似的生物活性成分已逐步得到驗(yàn)證［3,4］o本研究對(duì)杜仲內(nèi)生真菌的種類進(jìn)行分離及鑒定，以期了解杜仲內(nèi)生真菌的資源情況，進(jìn)一步研究其生物多樣性。1材料與方法1?1材料分離所用材料為杜仲的根、莖、葉，釆自西北農(nóng)林科技大學(xué)林學(xué)院校園內(nèi)，樹(shù)齡約20年，樹(shù)體健壯，無(wú)病蟲(chóng)害。1.2培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基為WA-抗生素培養(yǎng)基：瓊脂20g,氨節(jié)青霉素200mg,鏈霉素200mg,水1000mLo純化培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂2

5、0g,水1000mL,pH值為7.0?7.2o1.3試驗(yàn)方法1.3.1杜仲內(nèi)生真菌的分離取杜仲多年生根、莖，刮去外表皮后，剝下根皮、枝皮用無(wú)菌水沖洗干凈，用剪刀剪成1cmx1cm的小塊。在經(jīng)過(guò)紫外線消毒的接種間內(nèi)，把剪好的材料置于75%乙醇消毒1min,而后用2.5%次氯酸鈉消毒10min,再用75%乙醇消毒1min,無(wú)菌水沖洗2?3次，剪去邊緣，接入已倒好的WA-抗生素平板培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)皿置于28C培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)3?7do葉片直接剪為0.5cmxO.5cm大小，做與根、莖相同的處理，并進(jìn)行培養(yǎng)［5］。1.3.2杜仲內(nèi)生真菌的純化取切口處新長(zhǎng)出的菌絲,及時(shí)

6、轉(zhuǎn)接至新鮮PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待菌落出現(xiàn)后，根據(jù)菌落形態(tài)、顏色的差異以及長(zhǎng)出時(shí)間的不同，分別挑取各平板上的菌落邊緣的菌絲接于新的平板上進(jìn)行分離培養(yǎng)。培養(yǎng)數(shù)日后，觀察菌落的形態(tài)及其菌落邊緣的整齊情況，并做相應(yīng)的記錄。采用菌絲頂端純化法逐步純化，對(duì)菌株編號(hào)后,轉(zhuǎn)至PDA斜面培養(yǎng)基上，于28°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5?7d,然后放入4￡冰箱保存［6,7］01.3.3杜仲內(nèi)生真菌菌株鑒定從純化培養(yǎng)數(shù)日的菌落上挑取菌絲并連同分生鞄子制成玻片，置于光學(xué)顯微鏡下觀察菌絲形態(tài)、苞子梗形態(tài)、抱子形態(tài)以及抱子與營(yíng)養(yǎng)體之間的著生關(guān)系，對(duì)照有關(guān)資料確定真菌的分類學(xué)地位［8,9］02結(jié)果與分析

7、2.1杜仲內(nèi)生真菌的分離鑒定結(jié)果2.1.1菌株的分離鑒定從杜仲植物中分離獲得80株內(nèi)生真菌，經(jīng)顯微鏡下形態(tài)觀察，將80株內(nèi)生真菌分類鑒定為6目、8科、14個(gè)屬。其種群種類、數(shù)量、分布以及菌落特征和形態(tài)特征結(jié)果見(jiàn)表1、表2。從表1中可以看出，杜仲的內(nèi)生真菌中，以鏈格抱屬、鐮抱霉屬為優(yōu)勢(shì)種群，占總數(shù)的35%,其中鏈格抱屬最多，占20%,其次是鐮抱霉屬，占15%。2.1.2植物內(nèi)生真菌在杜仲不同部位中的分布從表2和表3中可以看岀，杜仲80株內(nèi)生真菌分布各有特點(diǎn)，根部分布的內(nèi)生真菌無(wú)論從數(shù)量和種屬上都占優(yōu)勢(shì)，有33株，10個(gè)屬；莖部26株，9個(gè)屬；葉部21株，6個(gè)屬。

8、其中鏈格抱屬、鐮鞄霉屬、莖點(diǎn)菌屬和腐霉