臍血造血干祖細(xì)胞研究現(xiàn)狀及臨床應(yīng)用

《臍血造血干祖細(xì)胞研究現(xiàn)狀及臨床應(yīng)用》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、臍血造血干/祖細(xì)胞研究現(xiàn)狀及臨床應(yīng)用臨床檢驗(yàn)雜志1999年第5期第17港進(jìn)展與講座作者：許文榮胡嘉波顧可梁單位：鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系80年代以來，臍血作為造血干/祖細(xì)胞來源治療血液病患者的有效方法受人們關(guān)注，山于臨床血液疾病治療的迫切需要，近年來較多的臨床血液病和實(shí)驗(yàn)血液學(xué)工作者為此付出了各向艱巨的努力，在臍血的釆集、造血T/祖細(xì)胞的分離、鑒定、體外擴(kuò)增及臨床應(yīng)用方而均取得了顯著成就，本文將這些研究成果作一概要文獻(xiàn)學(xué)習(xí)。1臍血造血干/祖細(xì)胞的含量和特性臍血中含有較豐富的更原始、能重建長期造血的十/祖細(xì)胞，具有

2、較強(qiáng)的口我增殖、多向分化的能力，是造血干/祖細(xì)胞乂一豐富來源。臍血中約有1%左右的有核細(xì)胞表達(dá)高水平的CD34抗原的表達(dá)。臍血CD34+細(xì)胞占有核細(xì)胞比例略低于件髓，但CD34+細(xì)胞中CD34+CD38一亞群比例明顯高于骨攏。1996年Darena[l]J

3、J流式細(xì)胞儀對臍血中的CD34+細(xì)胞作雙標(biāo)記定量分析發(fā)現(xiàn)，CD34占0.84±0.83%,人部分CD34+細(xì)胞屬于初始(initial)髄系分化細(xì)胞(CD34+CD33+)和運(yùn)鐵蛋門因子受體(CD71+)；近40%的細(xì)胞同時農(nóng)達(dá)CD45RA和CD117

4、,很少細(xì)胞表達(dá)CD2、CD5、CD41(<2%)；表達(dá)淋巴細(xì)胞分化標(biāo)記如CD2、CD5>CD7、CD10和CD19則小于6%。約有11%的CD34+細(xì)胞其表而缺乏HLA-DR和CD38。與竹髓和外周血相比人臍血(HUCB)CD34+細(xì)胞具有高度特界性。Kogler[2]對574份臍血的研究結(jié)果顯示,平均總的有核細(xì)胞數(shù)(NC)：8.5+5X108,紅系祖細(xì)胞(BFU-E)：9.5±8.6X105,粒單系祖細(xì)胞(CFU-GM)：5.7±6.3X105,粒、紅、單、巨核混合祖細(xì)胞(CFU-GEMM)：1.6±1

5、.9X105o本室研究結(jié)果顯示[10],CD34+細(xì)胞較文獻(xiàn)報道要高，而造血干/祖細(xì)胞存在形態(tài)學(xué)上的不均一性。2臍血造血T/祖細(xì)胞的分離和純化臍血造血干/祖細(xì)胞的分離和純化是研究臍血造血干/祖細(xì)胞和臨床應(yīng)用的關(guān)鍵因素Z一，迄今有以下兒種方法川于臍血造血干/祖細(xì)胞的分離和純化：①單純離心分離法，該方法分離的干/祖細(xì)胞損失率達(dá)40?80%；②不連續(xù)密度梯度離心法，臍血十7祖細(xì)胞主要集中于低密度(近1.063g/ml)組分中，該方法增加了體外操作的過程，易污染;③三聯(lián)袋(triplebloodbagsystem

6、)分步離心濃集法，該法可除去59%RBC,體積減少56%,CD34+細(xì)胞回收率為87%[3]；④Ficoll、peroll.卬基纖維索、明膠、淀粉等方法，有結(jié)果表明明膠法干/祖細(xì)胞損失率較低，集落形成細(xì)胞(CFC)、CD34+細(xì)胞的冋收率分別為92%和86%；⑤免疫磁珠吸附法(MACS),生物素-抗生素親和柱法，這些方法具有快速、純度好、產(chǎn)量髙等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已趨于商品化，并有應(yīng)用于臨床的報道；⑥流式細(xì)胞技術(shù)分選法(FCM),該方法以流式細(xì)胞儀分選CD34+及其亞群細(xì)胞純度對高達(dá)95%?99%,是口前分選CD3

7、4+細(xì)胞純度最高的方法，但耗時費(fèi)資，產(chǎn)率并不高，也難保持無菌，目前主要應(yīng)用于科研。因此選擇較好的臍血干/祖細(xì)胞分離純化的方法既?？紤]純度、產(chǎn)率、又要顧及牛物學(xué)活性及臨床應(yīng)川的可行性。3臍血造血細(xì)胞的體外擴(kuò)增雖然臍血造Jfn.T7ffl細(xì)胞有極強(qiáng)的增殖能力，但單份臍血屮造血77祖細(xì)胞含量少，難以滿足成人受者造血重建的需要，因而很大程度上限制了臍血造血干/祖細(xì)胞的臨床應(yīng)用。為此國內(nèi)外學(xué)者做了人量的工作。1992年Broxmeyer[4]率先采川干細(xì)胞因子(SCF)聯(lián)合GM-CSF,EPO,IL-3擴(kuò)增臍血MN

8、C,但擴(kuò)增后的細(xì)胞己不是具有增殖和分化雙重能力的造血干/祖細(xì)胞，因而給臨床應(yīng)用帶來了許多困難。1997年P(guān)iacibello等[5]從臍血中分離出CD34+細(xì)胞，采用無廿髓基質(zhì)的液體培養(yǎng)系統(tǒng)，觀察了多種細(xì)胞因子對臍血造血干/祖細(xì)胞的擴(kuò)增情況，IL-3+FL(FET3-Ligand),IL-3+KL(c-kitligand),IL-3+FL+KL,KL+FL,IL-6+FL+KL,8周后細(xì)胞數(shù)均得到了極人的擴(kuò)增，其屮IL-6+FL+KL擴(kuò)增細(xì)胞近3萬倍，CFU-GM增加了200倍，KL+FL擴(kuò)增細(xì)胞數(shù)近1萬

9、倍，CFU-GM增加了近40()倍，F(xiàn)L+TPO(thrombopoietin)培養(yǎng)臍血CD34+細(xì)胞6個月，細(xì)胞擴(kuò)增了T?萬倍，其中CD34+CD38一細(xì)胞擴(kuò)增了3T力倍，CD34+CD38+細(xì)胞擴(kuò)增了1T力倍，CFU-GM增加了1千萬倍,BFU-E擴(kuò)增了12.2萬倍，混合造血祖細(xì)胞(CFU-M1X)擴(kuò)增了4.5萬倍,CFU-GEMM擴(kuò)增了2.7萬倍，長期培養(yǎng)起始細(xì)胞(LTGIC)(培養(yǎng)20周)擴(kuò)增了8.3萬倍，CFU?Bl