甜菜組培論文

《甜菜組培論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、甜菜葉柄高效直接再生體系的建立殷東林，祝建波，張彥偉，向本春審（石河子大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新踹石河子832003）摘要：本實(shí)驗(yàn)從4中不同基因型甜菜中，通過預(yù)試驗(yàn)，選取KWS-9103作為實(shí)驗(yàn)材料，建立其葉柄高效直接再生體系。實(shí)驗(yàn)通過種植無菌苗、預(yù)培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，獲得了再生植株，建立了甜菜快速繁殖體系。結(jié)果表明：甜菜種子經(jīng)過消毒處理后培養(yǎng)，取幼苗在MS附加6-BA0.5mg/I,和NAAO.05mg/L的培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)，再取葉柄作為外植體轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS附加6-BAO.5mg/L和NAAO.05mg/L中誘導(dǎo)不定芽，不定芽誘導(dǎo)率為50%以上。在MS附加

2、IBA2.0mg/L生根培養(yǎng)基中生根，誘導(dǎo)生根率在90%以上，移栽成活率高達(dá)95%.關(guān)鍵詞：甜菜；葉柄；植株再生甜菜是2年生異交草木植物，由于其栽培馴化時間較短，遺傳背景狹窄，資源貧乏。特別是口交高度不親和性，往往使得優(yōu)良單株基因型很容易丟失，給優(yōu)良品種選育材料的繁殖和保存帶來了不少的困難山。因此可以通過植物組織培養(yǎng)為甜菜基因工程育種提供新的途徑。冃前關(guān)于甜菜組織培養(yǎng)的眾多研究表明，器官發(fā)生植株再生途徑與體細(xì)胞胚發(fā)生植株途徑相比更加方便、有效。宜接分化形成器官再生系統(tǒng)具有如卜-特點(diǎn)：獲得再生植株的周期短，操作簡單；由于未經(jīng)脫分化的細(xì)胞直接分化芽，因此體細(xì)胞無性系變

3、界小，能較好地保持受體植物的遺傳穩(wěn)定性⑵。因此采取直接器官發(fā)生再生植株方式（不經(jīng)歷愈傷組織階段）獲得的再生苗更適合作為轉(zhuǎn)化外源基因的受體植物?；诖宋覀冊囼?yàn)了4個甜菜品種進(jìn)行離體培養(yǎng)，建立了以葉柄為外植體高效直接誘導(dǎo)不定芽，再誘導(dǎo)芽生根進(jìn)而長成完整植株的快繁體系，為甜菜遺傳轉(zhuǎn)化奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。1材料和方法1.1材料STD0725STD2071KWS-9103p-2181.2試驗(yàn)方法1.2.1種子消毒與接種種子剝?nèi)ネ鈿ず筮x取飽滿的種子，用自來水浸泡一個小時。在超凈工作臺屮轉(zhuǎn)移到滅過菌的三角瓶中，分別采用兩種方法進(jìn)行消毒：（1）先用70%乙醇處理課題來源：石河子大學(xué)科

4、學(xué)研究發(fā)展計(jì)劃“動植物育種專項(xiàng)”（項(xiàng)忖編號:gxjs2OO7-yzl3）作渚*簡介：殷東林（1983?），男河南潢川人，碩士，主要從事分子生物學(xué)的研5uoE-mail:ydl669@126.com;Tel:13779702968'通訊作者:向本春（1958-），男,四川宣漢人,教授，博士生導(dǎo)師oE-mail:xbc@shzu.edu.cn;Tel:0993-205800930-60s,然后用0.1%的升汞處理8-10min,再用無菌水漂洗5?6次;(2)先用10%的H2O2處理3min,然后用0.1%的升汞處理8-10min,再用無菌水漂洗5?6次。將消過毒的種子

5、接種于含瓊脂0.7%蔗糖3%的1/2MS(PH二5.8)基本培養(yǎng)基上,在24°C±2°C下暗培養(yǎng)，使種子萌發(fā)。1.2.2預(yù)培養(yǎng)取發(fā)芽10天左右的小苗剪掉根部，分別轉(zhuǎn)移至三種預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基屮進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)：(1)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.025mg/L；(2)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L；(3)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0」mg/Lo培養(yǎng)條件：24°C±2°C,20001x,16h/do1.2.3不定芽誘導(dǎo)分別選取在預(yù)培養(yǎng)基中生長3040；50-60；80?90天的幼苗，取其葉柄lcm(從基部包括葉片連接處即3mm葉子和7m

6、m葉柄)作為外植體，分別接種到上述三種培養(yǎng)基屮進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)。培養(yǎng)條件：24°C±2°C,20001x,16h/do1.2.4誘導(dǎo)生根待不定芽長成4?5片葉子的幼苗時，切下轉(zhuǎn)入MS生根培養(yǎng)基中(附加2.0mg/LTBA)誘導(dǎo)生根，發(fā)育成完整植株。1.2.5植株移栽一個月左右，將長有2cm以上的粗壯根系的試管苗煉苗3犬后，取出植株，用口來水洗去根部瓊脂塊，種植于花土和蛭石(3:1)的花盆中，在15°C的陰涼環(huán)境中保濕10天即可成活。2結(jié)果與分析2.1基因型篩選通過種子的種植以及苗的預(yù)培養(yǎng)和葉柄的誘導(dǎo)分化，發(fā)現(xiàn)只有KWS-9103這一品種種子消毒后污染率低，發(fā)芽率高，

7、苗在預(yù)培養(yǎng)基中茁壯生長，且不定芽誘導(dǎo)率最高，故選其為最佳試驗(yàn)材料。在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)先用10%的H2O2處理3min,然后用0.1%的升汞處理8min,再用無菌水漂洗5?6次，這一處理消毒效果最好,發(fā)芽率在60%以上(見圖1)。如果用70%酒精處理不易掌握時間，消毒時間過短，污染嚴(yán)重；消毒時間過長則會抑制種子發(fā)芽。用0.1%的升汞消毒時間不宜過長，否則發(fā)芽率會降低。1.2預(yù)培養(yǎng)對幼苗生長的影響在不同培養(yǎng)基及不同激素組合的預(yù)培養(yǎng)基上幼苗生長表現(xiàn)不同，通過試驗(yàn)證明只有在MS+6-BA0.5mg/L+NAAO.05mg/L的預(yù)培養(yǎng)基中幼苗長勢最好(見表1；見圖2)。表1預(yù)培養(yǎng)

8、時激素組合