腫瘤耐藥基因檢測臨床應(yīng)用

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1、腫瘤耐藥基因檢測臨床應(yīng)用摘要目的：探討耐藥基因組合檢測的臨床應(yīng)用問題和表達(dá)結(jié)果與藥物間在個(gè)體化化療中的適配分析。方法：90例惡性腫瘤病例，應(yīng)用免疫組化染色檢測耐藥基因TS、GST-Pi、TOPOII和Ki-67的表達(dá)結(jié)果用以指導(dǎo)臨床化療；以定性結(jié)果與不同的半定量表達(dá)法結(jié)合指導(dǎo)選藥作適配分析。結(jié)果：總的陽性表達(dá)率TS48%,GST-Pi69%,Ki-67和TOPOII均為99%,而同一耐藥基因表達(dá)產(chǎn)物在不同類型腫瘤組織中的陽性表達(dá)率，TS為41%?100%,GST-Pi為24%為1%；在陽性半定量中，TS為1

2、0%?60%,GST-Pi和TOPOII均為10%?80%,Ki-67為10%~90%。三組適配分析方案中，以定性結(jié)果指導(dǎo)選藥，兩類以上藥物適配的病例只有66%；而以定性結(jié)合分級定量結(jié)果指導(dǎo)選藥可達(dá)到80%；再以定性聯(lián)合百分比定量結(jié)果指導(dǎo)選藥則上升到99%o結(jié)論：TS、GST-Pi.TOPOII和Ki-67組合檢測，基本上滿足各類惡性腫瘤耐藥基因的檢測需要；定性聯(lián)合百分比定量結(jié)果指導(dǎo)選藥能夠達(dá)到“個(gè)體化”的最佳適配。關(guān)鍵詞耐藥基因臨床應(yīng)用半定量表達(dá)法藥物適配資料與方法選擇2005年7月~2006年8月在我院

3、行手術(shù)治療患者，患方同意該項(xiàng)檢測的，術(shù)前未使用化療、放療和免疫治療的惡性腫瘤病例的術(shù)后標(biāo)本90例。男51例，女39例。年齡10?79歲，平均53歲。樣本包括：腺癌41例，鱗癌18例，乳腺浸潤性導(dǎo)管癌11例，非霍奇金惡性淋巴瘤5例，浸潤性小葉癌2例，滑膜肉瘤2例，大細(xì)胞間變型淋巴瘤、霍奇金惡性淋巴瘤、多型性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、骨巨細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞癌、上皮樣平滑肌肉瘤、胃間質(zhì)腫瘤、粒層細(xì)胞瘤、無性細(xì)胞瘤、惡纖組和惡性神經(jīng)鞘瘤各1例。標(biāo)本處理和免疫組化染色：標(biāo)本均用4%中性甲醛固定，組織處理溫度W6(rc,石蠟包埋，每例

4、選擇1個(gè)典型腫瘤蠟塊，連續(xù)切片厚4um。玻片用2%APES的純丙酮溶液涂布。應(yīng)用標(biāo)記的葡聚糖-聚合物免疫組化染色法(LDP兩步法)，采用3%H?20?2孵育阻斷內(nèi)源性過氧化物酶、檸檬酸緩沖液高壓鍋抗原修復(fù)。定性分析:①陽性：TS和GST-Pi胞漿/胞核胞漿均染成棕黃色，T0P0II和K1-67胞核染成棕黃色則判為陽性細(xì)胞[2]。②陰性：TS和GST-Pi胞漿無著色，T0P0II和Ki-67胞核無著色，或與背景顏色一致，或陽性細(xì)胞<5%則判為陰性。半定量分析:①分級表達(dá)法(DAK0基因公司推薦的常用標(biāo)準(zhǔn)):陽

5、性細(xì)胞數(shù)5-25%(+),25-75%(+[KG-*2]+),>75%(+[KG—*2]+[KG—*2]+)。②百分比表達(dá)法(我們摸索的標(biāo)準(zhǔn)，理論根據(jù)見討論部分)：陽性細(xì)胞數(shù)精確到10%。結(jié)果切片染色背景清晰，陰性與陽性細(xì)胞對比鮮明。統(tǒng)計(jì)分析:①定性分析結(jié)果見表。②半定量分析結(jié)果：a.分級表達(dá)結(jié)果：TS：(+)21例，(+[KG-*2]+)22例；GST-Pi：(+)11例，(+[KG-*2]+)48例，(+[KG-*2]+[KG-*2]+)3例；TOPOII:(+)23例，(+[KG-*2]+)65例，(

6、+[KG-*2]+[KG-*2]+)1例;Ki-67：(+)9例,(+[KG-*2]+)72例，(+[KG-*2]+[KG-*2]+)8例。b.百分比表達(dá)結(jié)果：TS：32%(10~60)；GST-Pi：49%(10~80)；TOPOII:36%(10~80)；Ki-67：53%(10?90)。討論結(jié)果分析:①兩種半定量表達(dá)法比較在定性分析中，三種耐藥基因的陽性表達(dá)率均較高，而同一耐藥基因表達(dá)產(chǎn)物在不同類型腫瘤組織中的陽性表達(dá)率亦有差異，表明相同類型腫瘤個(gè)體間和不同類型腫瘤間均存在耐藥差異，故耐藥基因檢測具有

7、重要的臨床意義。在半定量分析中，三種耐藥基因陽性定量在各個(gè)體間變異較大(10%~90%),分級表達(dá)法中25%與75%的陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)劃分在同一級中，其差異太大，不能精確反映出個(gè)體間的變異，從分級表達(dá)統(tǒng)計(jì)結(jié)果中可見(+[KG-*2]+)均占陽性病例的大部分，表明直接影響總體精確度的反映；而百分比表達(dá)法精確到10%時(shí)，即使誤差也不會(huì)導(dǎo)致如此大的表達(dá)值差異，從而較精確地反映出個(gè)體化的具體變異值，而且有助于選擇藥物與耐藥基因表達(dá)結(jié)果間達(dá)到最佳適配(見后文)，也可根據(jù)個(gè)體對各類藥物敏感細(xì)胞的比例作為相應(yīng)藥物用量比例的

8、參考；配合K1-67的表達(dá)結(jié)果，有助于周期特異性與非特異性抗癌藥物的較好搭配與選擇。由于TopoII也作為細(xì)胞增殖指數(shù)[1],基本上可替代Ki-67表達(dá)的意義，但我們的結(jié)果中TopoII半定量(36%)低于Ki-67(53%),并不能完全替代Ki-67表達(dá)的意義。②根據(jù)耐藥機(jī)制將耐藥基因檢測陽性結(jié)果與不同的半定量表達(dá)法結(jié)合直接影響化療選藥與檢測結(jié)果間的適配；三種適配分析方案中，如果僅以定性結(jié)果指導(dǎo)選藥，達(dá)到兩大類