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《淺談豬流行性腹瀉診斷方法》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、淺談豬流行性腹瀉診斷方法【摘要】豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病，以水樣腹瀉、嘔吐、脫水和食欲下降為主要特征。PED給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)較大損失，因此對(duì)其早期的診斷具有重大的意義，本文針對(duì)該病的診斷方法進(jìn)行綜述，以期為該病的防治提供一定的理論依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】豬流行性腹瀉；流行病學(xué)；診斷方法豬流行性腹瀉(Porcineepidemicdiarrhea,PED)是由套式病毒目冠狀病毒科冠狀病毒屬的豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病，以水樣腹瀉、嘔吐、脫水和
2、食欲下降為主要特征的傳染病。多常見(jiàn)于寒冷冬季，本文針對(duì)PED的診斷方法進(jìn)行綜述，具體如下。1流行病學(xué)診斷豬流行性腹瀉發(fā)病多呈季節(jié)性，12月至2月多發(fā)，其他季節(jié)也可發(fā)生。該病自1971年首次在英國(guó)暴發(fā)以來(lái)，相繼在比利時(shí)、德國(guó)、匈牙利、瑞士等許多歐洲國(guó)家也都暴發(fā)了PED,1978年在英國(guó)和比利時(shí)首次報(bào)道分離到該病毒株，我國(guó)于1980年首次成功分離到PEDVo1周齡哺乳仔豬受害最嚴(yán)重，病死率平均50%,2?4d內(nèi)可因脫水而死亡；4?5周齡的哺乳仔豬病死率不髙，若母源抗體的水平不高的話，可發(fā)生輕微腹瀉。成年豬可能只表現(xiàn)沉郁、
3、厭食和嘔吐，一般經(jīng)4?5d即可好轉(zhuǎn)［1］。2臨床及病理診斷該病的臨床癥狀主要是發(fā)病豬群都呈黃色水樣腹瀉，體溫基本正常，少數(shù)病豬出現(xiàn)體溫升高1?21,并帶有惡臭氣味的稀便等特征。剖檢的病理變化主要為腸管積液，鼓起，腸系膜充血、水腫，淋巴結(jié)水腫等。病豬的組織學(xué)變化主要為空腸中后部的小腸絨毛上皮細(xì)胞脫落、絨毛變短，但在結(jié)腸，未能觀察到組織病理學(xué)變化。3實(shí)驗(yàn)室診斷3.1病原學(xué)診斷3.1.1病毒的分離與鑒定：將采集的腸道內(nèi)容物經(jīng)過(guò)處理，反復(fù)凍融后，通過(guò)220nm微孔濾膜過(guò)濾，取其毒液接種到Vero細(xì)胞上培養(yǎng)，通過(guò)觀察細(xì)胞病變，
4、然后結(jié)合相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，確定該病毒是否為PEDV,但改方法耗時(shí)、費(fèi)力、不容易分離出來(lái)。3.1.2免疫電鏡法：免疫電鏡法(IEM)可以用來(lái)判定PEDVo王繼科等［2］把抗原和抗體分別經(jīng)10000g/min離心,免疫復(fù)合物又經(jīng)12000g/min離心，最后在電鏡下直接觀察到典型的病毒粒子形成的免疫復(fù)合物，建立了具有3次篩選作用的改良的IEM法，具有簡(jiǎn)便、直觀、快速和定性正確等優(yōu)點(diǎn)。由于該實(shí)驗(yàn)需要一定條件的實(shí)驗(yàn)儀器和人力，所以在養(yǎng)殖場(chǎng)推廣應(yīng)用有一定的難度。3.2血清學(xué)診斷3.2.1免疫熒光法：免疫熒光法（IF）—般分為直接
5、免疫熒光法（FAT）、間接免疫熒光法（IFAT）和免疫過(guò)氧化物酶技術(shù)，3種方法都可應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室診斷，但前者較為常用。3.2.2微量血清中和試驗(yàn)：病毒活毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，失去對(duì)易感動(dòng)物群的致病力，稱之為中和試驗(yàn)。林志雄等［3］建立了PEDV微量中和試驗(yàn)，采用適應(yīng)于傳代細(xì)胞生長(zhǎng)的PEDV-GI株，以PK-15（豬腎細(xì)胞）作為指示細(xì)胞，48h判定。研究表明該方法檢驗(yàn)準(zhǔn)確、可靠、具有較高的敏感性、可用于流行病學(xué)調(diào)查。3.3分子生物學(xué)診斷：分子生物學(xué)技術(shù)具有簡(jiǎn)單方便、準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)、敏感度高、檢測(cè)速度較快等優(yōu)點(diǎn)，已被
6、廣泛的應(yīng)用于臨床檢測(cè)中。對(duì)于PEDV的檢測(cè)，目前來(lái)說(shuō)主要采用了原位雜交技術(shù)（ISH）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）2種方法。3.3.1原位雜交技術(shù)（ISH）：原位雜交技術(shù)（Insituhybridization,ISH）是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門(mén)新興技術(shù)，始于20世紀(jì)60年代oOkjinKim等［4］利用標(biāo)記地高辛的核酸探針，通過(guò)一系列的處理后，標(biāo)記地高辛的核酸探針可以與人工感染仔豬的PEDV的核衣殼蛋白基因進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，通過(guò)透射電鏡下觀察到仔豬的空腸和結(jié)腸的上皮細(xì)胞的胞質(zhì)呈黑色。從而可以證明是
7、PEDV感染的仔豬腹瀉。3.3.2PCR技術(shù)診斷3.3.2.1反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(RT-PCR):國(guó)外，Ishikawa等［5］根據(jù)S基因序列設(shè)計(jì)了一對(duì)可擴(kuò)增目的片段854bp的引物，成功的建立了診斷PEDV的RT-PCR法，可進(jìn)行細(xì)胞毒和糞便毒的檢測(cè)。盡管此法敏感性和特異性都很好，但由于對(duì)儀器設(shè)備等要求很高，只能適合于實(shí)驗(yàn)室診斷,不能廣泛應(yīng)用于臨床診斷。國(guó)內(nèi)，楊群等根據(jù)設(shè)計(jì)了PEDV的M基因保守區(qū)及TGEV的S基因5’端保守區(qū)，進(jìn)行了二聯(lián)RT-PCR檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有較好的特異性和敏感性。3.3.2.2熒光定量
8、PCR：熒光定量PCR(Fluorescencequantitativepolymerasechainreaction,FQ-PCR)技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。該方法避免了傳統(tǒng)PCR方法的易污染、處理步驟較繁瑣等缺點(diǎn)，因此在PEDV的診斷方面，取
