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1、摘要人白細(xì)胞介素13(interleukin13,IL-13)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子,是造血因子家族的新成員，具有調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞、抑制HIV復(fù)制、促進(jìn)原始造血前體細(xì)胞的增殖及分化等功能。本論文用超聲波核化學(xué)滲透兩種細(xì)胞粉碎方法對IL-13基因工程菌進(jìn)行了細(xì)胞破碎實(shí)驗(yàn)，并系統(tǒng)地考察了pH、溫度、時(shí)間、化學(xué)試劑等因素對細(xì)胞破碎效果的影響，得岀了最佳的細(xì)胞破碎核包涵體融解工藝條件。將破碎后的菌懸液用雙水相萃取的方法進(jìn)行了口標(biāo)產(chǎn)物的初步分離純化，并對雙水相體系的齊影響因素進(jìn)行了深入細(xì)致的研究。這將為我們進(jìn)一步地研究以包涵
2、體形式存在于基因工程菌內(nèi)地H標(biāo)產(chǎn)物分離純化新方法打下良好的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：IL-13,包涵體，細(xì)胞破碎，雙水相，分離AbstractInterleukin(IL-13)isarecentlydescriedproteinandamemberofthefamilyofhematopoietics.ItisaproteininvitromodulatorofBlymphocyteandmonocytefunctions.Recently,itwasreportedthatitalsocouldinhibittheHIVreplica
3、tioninmonocyteandregulateproliferationanddifferentiationofprimitivehematopoieticsprogenitorcells.Inthisstudy,wetrydisruptingJM109cellsbymeansofultrasonicandchemicalosmosis,primarilytestingthefunctionsofpH,temperature,time,chemicalreagentandsoon,andachievinganoptimal
4、processofcelldisruptionandinclusionsolution.Inaddition,wecarryonthepartitionofGST-IL-13byaqueoustwo-phasesystemandcarefullychecktheeffectsofthemainprocessingparameters.Keywords：IL-13,inclusion,celldisruption,aqueoustwo-phase,Partition目錄第一章前言11」發(fā)展生化“下游”技術(shù)的意義11.2基因工程蛋
5、白質(zhì)分離純化的原則11.3現(xiàn)有白細(xì)胞介素一13的分離純化方法71.4蛋白質(zhì)分離純化的方法91.5木論文的立項(xiàng)背景及研究內(nèi)容12第二章實(shí)驗(yàn)材料與方法132.1概述132.2實(shí)驗(yàn)材料與方法15第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論173.1GST-IL-13的誘導(dǎo)培養(yǎng)173.2GST-IL-13總含量的測定203.3化學(xué)破碎223.4GS雙水相萃取的研究23第四章結(jié)論與展望244.1結(jié)論244.2對進(jìn)一步研究的展望26參考文獻(xiàn)27致謝28附錄29第一章前言1.1發(fā)展生化“下游”技術(shù)的意義現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展使當(dāng)今世界發(fā)生了日新月異的變化。迄今為止
6、，人們已經(jīng)能夠設(shè)計(jì)、制造、生產(chǎn)多種具有重要價(jià)值的蛋白質(zhì)，如胰島素(insulin)、白細(xì)胞介素(interleukin)、干擾素(interferon)、促紅細(xì)胞生長素(EPO)和腫瘤壞死因子(TNF)等。……1.2基因工程蛋白質(zhì)分離純化的原則生物產(chǎn)品有許多使生物高分子，必須考慮到產(chǎn)品的變性和活性恢復(fù)等問題。如果選取的條件合適，也可以通過耦合不同技術(shù)來改進(jìn)分離工藝。一般認(rèn)為，要實(shí)現(xiàn)基因工程蛋白質(zhì)分離純化的高效率、高純度和低成本必須做到以下幾點(diǎn)：①使用溫和、高效的方法；②盡可能地減少操作步驟；③減少化學(xué)和生化試劑地使用。Prok
7、opakis等提出了優(yōu)化分離純化步驟的基本規(guī)則，用以指導(dǎo)分離純化操作的改進(jìn)。具體規(guī)則如下：①選擇分離操作必須基于產(chǎn)品的物理化學(xué)性質(zhì)和生化性質(zhì)；②高產(chǎn)量的朵蛋白必須要除去；③最高效率地利用ri標(biāo)產(chǎn)物與雜質(zhì)間地理化性質(zhì)差異；④盡可能地將高效的步驟放在前而；⑤把操作最困難的步驟放在最后山2】。1.3現(xiàn)有白細(xì)胞介素一13的分離純化方法1993年，Mckcnzic首次提出白細(xì)胞介素一13(IL-13)的名字，此后，人們逐漸發(fā)現(xiàn)了IL-13的許多生物學(xué)活性：刺激前髓樣細(xì)胞(TF—1)的增殖，直接誘導(dǎo)原始造血前體細(xì)胞(Lin~Sca-l+)
8、的增殖及分化；誘導(dǎo)B細(xì)胞表達(dá)MHC-II類抗原和CD23,并存進(jìn)其增殖及分泌Ig;抑制HIV單核細(xì)胞小的復(fù)制，并具有抗炎、抗腫瘤等多種作用。第二章實(shí)驗(yàn)材料與方法2.1概述本論文主要從IL-13地分離純化入手，將傳統(tǒng)的細(xì)胞破碎和雙水相萃?。ㄟx擇PEG鹽系統(tǒng)）用于IL-13的提純
