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1、懷地黃多糖化學(xué)研究更新日期：2011-01-23點(diǎn)擊：楊云 苗明三 王浴銘 提要 采用DEAE-Cellulose及SephadexG-200柱層析，從懷地黃水提取物中分離出一多糖RG，醋酸纖維素薄膜電泳，高效凝膠滲透色譜證實(shí)，RG為單一組份，薄層層析和氣相色譜分析表明，該多糖由葡萄糖、半乳糖、鼠李糖和甘露糖組成?！ ￡P(guān)鍵詞 懷地黃；多糖；化學(xué)研究ChemicalStudyonPolysaccharideConstituentofRehmanniaGlutinosaLibosch.F.HueiChinensisHsiaoYangYun,MiaoMingsan,WangYu
2、mingHenanCollegeofTCM,Zhengzhou450003 Abstract ThispaperreportedthechemicalstudyonpolysaccarideconstituentofRehmanniaGlutinosaLibosch.f.HueichinensisHsiao.FromthewaterextractsofthistraditionalChinesemedicine,apolysaccaride,namedRG,wasisolatedbyDEAE-celluloseandSephadex-200columnchromatogr
3、aphy.ThepolysaccharidewashomogeneousjudgedbyHPGPCandacetatecellulosefilmelectrophoresis.TLCandGCshowedthatRGwascomposedofglucose,galactose,rhamnoseandmannose. Keywords RehmanniaGlutinosa;Polysaccharide;Chemicalstudy 懷地黃(RehmanniaglutinosaLibosch.f.hueiChinensisHsiao)系玄參科地黃屬植物，為常用中藥，也是河南地
4、道藥材之一。其炮制品熟地黃具有滋陰補(bǔ)腎、補(bǔ)血調(diào)經(jīng)的功效，主要用于腰膝酸軟、頭暈耳鳴、腎虛等。在尋找地黃補(bǔ)益活性成分的研究中，我們發(fā)現(xiàn)其多糖具有提高正常小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，增重小鼠免疫器官(肝、脾)以及促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能等作用。因此，對多糖部分進(jìn)行了進(jìn)一步的分離純化及初步化學(xué)研究?！ ? 儀器、藥品及試劑 GPC測定儀為HP-1090M(帶GPC軟件)，示差折光儀為HP-1037ARI，柱為μ-BondagelE-1000，均為美國惠普公司產(chǎn)品。GC儀為HP5890Ⅱ型，OV-17彈性石英毛細(xì)管柱，3396積分儀。DEAE-Cellulose為whatman產(chǎn)品。
5、SephadexG-200為pharmacia產(chǎn)品。測定分子量所用標(biāo)準(zhǔn)品ShodexStandardPullulanP-82系列為SHOWADENICOK.K公司產(chǎn)品。醋酸纖維素薄膜為浙江黃巖曙光化工廠產(chǎn)品。各種單糖標(biāo)準(zhǔn)品為Merck出品。除乙醇為工業(yè)級外，其余溶劑均為分析純。 2 多糖的提取分離 熟地，粉碎，乙醇滲漉至流出液淺黃色為止，藥渣揮去乙醇，熱水提取3次，濾液濃縮，加1%鞣酸至不再產(chǎn)生沉淀，煮沸15min，加入20%活性炭攪拌10min，抽濾，濾液逆向流水透析3d，濃縮，調(diào)含醇量80%，濾取沉淀，以無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，P2O5干燥器干燥，得粗多糖。
6、 取粗多糖進(jìn)行DEAE-Cellulose柱層析，依次以H2O、0～2mol/LNaCl溶液梯度洗脫，分部收集，苯酚－硫酸法檢測，合并單一峰位，再經(jīng)SephadexG-200反復(fù)柱層析，洗脫劑及檢測方法同前，結(jié)果得到一個單一組份，經(jīng)蒸餾水透析，濃縮，醇沉，干燥，得地黃多糖RG。 3 純度及分子量測定 3.1 純度測定 3.1.1 醋酸纖維素膜電泳：醋酸纖維素膜(3cm×10cm)，硼砂緩沖液(pH9.2)。電壓340V，時間30min，0.5%阿利新藍(lán)的3%醋酸液顯色，RG呈單一黃色色帶?！ ?.1.2 GPC測定：取RG加水溶解，濾過，進(jìn)樣，流動相0.02%NaN2
7、水溶液，流速0.5ml/min，示差折光檢測，結(jié)果RG洗脫峰為單一對稱峰，說明為均一組份，見圖1。圖1 TheGPCElutionPatternofRG 3.2 分子量測定：先以GPC測定各多糖標(biāo)準(zhǔn)品ShodexStandardPullulanP-82系列(P-200，P-100，P-50，P-10，P-5)及藍(lán)色5組：即正常對照組、缺血模型組、消栓口服液組及熄風(fēng)康高、低劑葡聚糖的保留時間，以logMW對保留時間做圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線，同法測出RG保留時間，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得分子量為3.57×104?！ ? 完全酸水解及糖
