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1、高效毛細(xì)管電泳 及其在農(nóng)藥分析中的應(yīng)用徐娟理學(xué)院030360002一、問題的提出我國(guó)現(xiàn)有中藥種類已達(dá)12807種，其中藥用植物11146種，藥用動(dòng)物1581種，藥用礦物80種．中草藥在保護(hù)人民群眾健康方面起著重要作用．由于需求量大，野生中草藥遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求，目前大部分中草藥都依賴人工栽培．全國(guó)藥材種植面積超過580萬畝，藥材生產(chǎn)基地600多個(gè)，常年栽培的藥材達(dá)200余種．為了保障種植藥材的產(chǎn)量，藥農(nóng)不得不頻繁地使用各種農(nóng)藥．農(nóng)藥殘留不僅影響群眾的健康，還影響我國(guó)名貴藥材的出口創(chuàng)匯．如80年代末云南省出口日本的三
2、七大量退貨，目前我國(guó)人參在海外市場(chǎng)日益受韓國(guó)高麗參的排擠等，都有農(nóng)藥殘留超標(biāo)的原因．二、CE的裝置及基本原理毛細(xì)管電泳儀在實(shí)驗(yàn)室中三、CE的特點(diǎn)高質(zhì)量靈敏度：常用紫外檢測(cè)器的檢測(cè)限可達(dá)10-13－10-15mol，激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器(LIF)則達(dá)10-19-10-21。。高分辨率：每米理論塔板數(shù)為幾十萬，高者可達(dá)幾百萬乃至幾千萬。高速度：許多分析可在10分鐘內(nèi)完成，有的可在60秒內(nèi)完成。所需樣品少：只需納升(10-9升)的進(jìn)樣量。成本低：只需少量(幾毫升)的流動(dòng)相和低廉的毛細(xì)管。應(yīng)用范圍廣：除分離生物大分子（肽、蛋白、
3、DNA和糖等）外，還可用于小分子(氨基酸、藥物等)及離子(無機(jī)及有機(jī)離子等)，甚至可分離各種顆粒(如硅膠顆粒等)。：三高二少一廣四、CE的分離模式1毛細(xì)管區(qū)帶電泳(capilaryzoneelectrophoresis,CZE)CZE的分離機(jī)理是基于各被分離物質(zhì)的凈電荷與質(zhì)量比(荷質(zhì)比)間的差異。應(yīng)用范圍包括氨基酸、肽、蛋白、離子分析、對(duì)映體拆分和很多其它離子態(tài)物質(zhì)的分析。2膠束電動(dòng)色譜(micellarelectrokineticcapillarychromatography，MECC)MECC是唯一既能分離中性溶質(zhì)
4、又能分離帶電組分的CE模式。采用表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉，SDS)在操作緩沖液內(nèi)形成有一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束相。利用溶質(zhì)具有不同的疏水性，在水相和膠束相(準(zhǔn)固定相)間分配的差異得以分離。主要用于小分子、中性化合物，手性對(duì)映體、各種藥物等。3毛細(xì)管凝膠電泳(capillarygelelectrophoresis，CGE)CGE是將凝膠移到毛細(xì)管中作支持物進(jìn)行的電泳。不同體積的溶質(zhì)分子在起“分子篩”作用的凝膠中電泳分離。常用于蛋白質(zhì)、寡聚核苷酸、RNA、DNA片斷分離和測(cè)序及PCR產(chǎn)物分析?，F(xiàn)在還有采用無膠篩分方
5、法，同樣可達(dá)分離目的。4毛細(xì)管等電聚焦(capillaryisoelectricfocusing，CIEF)CIEF是用兩性電解質(zhì)在毛細(xì)管內(nèi)建立pH梯度，使各種具有不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)在電場(chǎng)作用下遷移到等電點(diǎn)的位置，形成一非常窄的聚焦區(qū)帶。已成功用于測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)，分離異構(gòu)體或用其它方法難于分離的蛋白質(zhì)。5毛細(xì)管等速電泳(capillaryisotachophoresis，CITP)CITP采用先導(dǎo)電解質(zhì)和尾隨電解質(zhì)，使溶質(zhì)按其電泳淌度不同得以分離，是一種較老的方式?，F(xiàn)在可作為柱前濃縮方法用于富集樣品。6毛細(xì)管電色譜(
6、capillaryelectrochromatography，CEC)CEC是將HPLC中眾多的固定相微粒填充到毛細(xì)管中，以樣品與固定相之間的相互作用為分離機(jī)制，以電滲流為流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力的色譜過程。雖然柱效有所下降，但增加了選擇性，是一種有發(fā)展前景的模式。五、在農(nóng)藥分析中的應(yīng)用1.定量分析研究2.在農(nóng)藥制劑和原藥中有效成分的測(cè)定3.在農(nóng)藥中雜質(zhì)的分離和測(cè)定4.手性農(nóng)藥分析六、應(yīng)用實(shí)例－毛細(xì)管電泳法研究提取劑對(duì)黃連－黃柏共煎劑中生物堿含量的影響樣品制備粉碎－過篩－浸泡－回流－用水提取－提取劑提取2.電泳分析穩(wěn)定儀器－確定檢
7、測(cè)波長(zhǎng)－選擇緩沖溶液－電泳檢測(cè)3、結(jié)果與分析成分分析按照?qǐng)D1b中所示得試驗(yàn)條件，采用加入法測(cè)定小檗堿等得溶液電泳圖，結(jié)果見圖2。1至6峰對(duì)應(yīng)的化合物分別為黃連堿、小菜堿、麥小菜堿、巴馬汀、藥根堿、小菜紅堿。與圖1b的結(jié)果相比較，黃連。黃柏配伍后共煎浸膏中的主要成分為黃連堿、小果堿、麥小菜堿、巴馬汀和藥根堿。線性關(guān)系配制一系列小菜堿和巴馬汀的標(biāo)準(zhǔn)混合镕液，在同一條件下測(cè)定電泳圖，以峰面積對(duì)濃度作圖，結(jié)果小菜堿和巴馬汀分別在15.0～65.0mg／L，12.5～50.0mg/L之間有良好的線性關(guān)系，回歸方程為：小檗堿：y＝
8、1455.3C—2134r＝0．9984(1)巴馬?。簓＝797．63C十3462．2r＝0．9995(2)八、結(jié)束語CE作為一種新的分離手段，在農(nóng)藥分析中有廣泛的應(yīng)用前景。它的微量，解決了中藥提取的困難。它的高效，使中藥多種成分的同時(shí)分離成為可能，它的快捷提高了分析效率。與MS聯(lián)用，在定量的同時(shí)對(duì)每種成分的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析。另外，
