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1、第10章經典液相色譜法1.定義：經典液相色譜法包括柱色譜和平面色譜，是在常壓下靠重力或毛細作用輸送流動相的色譜方法。吸附色譜法分配色譜法離子交換色譜法空間排阻色譜法一、吸附色譜法分離原理利用被分離組分對固定相表面吸附中心吸附能力的差別而實現分離。吸附過程是試樣中組分的分子(X)與流動相分子(Y)爭奪吸附劑表面活性中心的過程，即為競爭吸附過程。吸附系數與吸附劑的活性、組分的性質和流動相的性質有關。吸附色譜法固定相多為吸附劑，如硅膠、氧化鋁。硅膠表面硅醇基為吸附中心。經典液相柱色譜和薄層色譜：一般硅膠高效液相色譜：球型或無定型全多孔硅膠和堆積硅珠。
2、氣相色譜：高分子多孔微球等三、吸附劑和展開劑的選擇（一）常用吸附劑——多孔、微粒狀物質（1）硅膠（2）氧化鋁（3）聚酰胺1.硅膠吸附活性：硅醇基特性：（1）與極性物質或不飽和化合物形成氫鍵物質極性↑，吸附能力↑吸附活性次序：活潑型>束縛型>游離型（2）吸水→失活105~110OC烘干30分鐘(可逆失水)→吸附力增大500OC烘干(不可逆失水)→活性喪失，無吸附力適用：分析酸性或中性物質2.氧化鋁堿性氧化鋁pH9~10適于分析堿性、中性物質中性氧化鋁pH＞7.5適于分析酸性堿性和中性物質酸性氧化鋁pH4~5適于分析酸性、中性物質3.聚酰胺氫鍵作用
3、氫鍵能力↑，吸附能力↑（二）吸附劑和展開劑的選擇：依據被測組分、吸附劑和展開劑的性質（1）被測組分性質（極性大小）：烴＜--------＜羧酸，醇（2）吸附劑的活性：吸附劑的活性大，對被測組分的吸附能力強強極性物質——選擇弱吸附劑弱極性物質——選擇強吸附劑（3）展開劑的極性：展開劑極性大，對被測組分的洗脫能力大“相似相溶”原則：根據組分性質、吸附劑的活性，選擇適當極性的展開劑。組分吸附劑展開劑非(弱)極性活性大非極性或弱極性極性活性小極性（三）三者關系：吸附色譜法流動相有機溶劑（硅膠為吸附劑）洗脫能力：主要由其極性決定。強極性流動相占據吸附中心
4、的能力強，洗脫能力強，使k值小，保留時間短。Snyder溶劑強度?o：吸附自由能，表示洗脫能力。?o值越大，固定相對溶劑的吸附能力越強，即洗脫能力越強。一些溶劑在硅膠上的?o值溶劑溶劑強度（?o）溶劑溶劑強度（?o）正戊烷0.00甲基特丁基醚0.48正己烷0.00醋酸乙酯0.48氯仿0.26乙腈0.52二氯甲烷0.40異丙醇0.60乙醚0.43甲醇0.70吸附色譜法洗脫順序ka=KaSa/Vm在色譜柱（Sa與Vm一定）時，Ka大的組分保留強，后被洗脫，Ka小的組分在吸附劑上保留弱，先被洗脫。Ka與組分的性質（極性、取代基的類型和數目、構型有關）
5、。二、分配色譜法分配色譜法分離原理利用被分離組分在固定相或流動相中的溶解度差別而實現分離。溶質分子在固定相中溶解度越大，或在流動相中溶解度越小，則K越大。在LLC中K主要與流動相的性質(種類與極性)有關；在GLC中K與固定相極性和柱溫有關。分配色譜法固定相又稱固定液（涂漬在惰性載體顆粒上的一薄層液體；化學鍵合相（通過化學反應將各種有機基團鍵合到載體上形成的固定相）。流動相氣液分配色譜法：氣體，常為氫氣或氮氣。液液分配色譜法：與固定相不相溶的液體。正相液液分配色譜：流動相的極性弱于固定相的極性。反相液液分配色譜：流動相的極性強于固定相的極性。分配
6、色譜法洗脫順序由組分在固定相或流動相中溶解度的相對大小而決定。正相液液分配色譜：極性強的組分后被洗脫。（庫侖力和氫鍵力）反相液液分配色譜：極性強的組分先出柱。載體：對載體的要求：化學惰性；對組分的吸附力小，但能吸留較大量的固定相液體。載體必須純凈，顆粒大小。常用載體：硅膠、硅藻土、纖維素。三、離子交換色譜法分離原理利用被分離組分離子交換能力的差別而實現分離。分為陽離子交換色譜法和陰離子交換色譜法。陽離子交換：陰離子交換：離子交換通式：交換再生++3RNR+OH-ClRNR+3ClOH交換再生++RSOH+Na+Na++33HRSO與固定相（離子
7、交換樹脂）親和力弱的組分在固定相上保留時間短，先流出色譜柱，與固定相（離子交換樹脂）親和力強的組分在固定相上保留時間長，后流出色譜柱。四、空間排阻色譜法分離原理根據被分離組分分子的線團尺寸進行分離。也稱為分子排阻色譜法。分子量大的組分不能進入固定相內部，行走的路徑短，先流出色譜柱，分子量小的組分可以進入固定相孔徑深處，行走的路徑長，保留時間長，后流出色譜柱?？臻g排阻色譜法固定相 多孔凝膠：軟質、半軟質和硬質主要性能參數平均孔徑排斥極限（Kp=0）：不能滲透進入凝膠的任何孔隙最低分子量分子量范圍：排斥極限（Kp=0）與全滲透點（Kp=1）之間的分
8、子量范圍圍。選擇凝膠時應使試樣的分子量落入此范圍。空間排阻色譜法流動相要求：能溶解試樣、潤濕凝膠，粘度要低水溶性試樣選擇水溶液為流動相(稱為凝膠過濾色
