組培+3、培+養(yǎng)+基(1)

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1、3.培養(yǎng)基3.1培養(yǎng)基的種類和命名最早的培養(yǎng)基：1860年Sackst和1861年Knop設(shè)計的營養(yǎng)液30-40年代設(shè)計的培養(yǎng)基：White(1943)，Gautheret(1939)50年代：Heller(1953)60年代設(shè)計的培養(yǎng)基：White(1963),MS(1962)（MurashigeandSkoog(1962)）,Nitsch(1969),N6(1974)培養(yǎng)基的命名：發(fā)表人+發(fā)表年號常用培養(yǎng)基及其特點：第一類：高鹽培養(yǎng)基MS（Murashige和Skoog,1962)LS（Linsmaier和Skoog,1965),BL(BrownandLawrence,1

2、968),第二類：高硝酸鹽培養(yǎng)基B5N6SH(SchenkHildebrandt,1972)常用培養(yǎng)基及其特點：第三類：中鹽培養(yǎng)基H（Bourgin和Nitsch,1979),Nitsch(1969)第四類：低鹽培養(yǎng)基White(1943),WS(WolterSkoog,1966),HE(Heller,1953)3.2培養(yǎng)基的成份3.2.1無機營養(yǎng)成份大量元素：氮、磷、鉀、鈣、鎂、硫（濃度大于0.5mmol/L)微量元素：鐵、錳、銅、鋅、硼、氯、碘、鉬、鈉(濃度小于0.5mmol/L)3.2培養(yǎng)基的成份關(guān)于硝酸鹽和銨鹽當(dāng)作為唯一氮源時硝酸鹽比銨鹽好，但單獨使用培養(yǎng)基的PH會向

3、堿性漂移，加入少量的銨鹽或還原態(tài)氮源可阻止漂移。關(guān)于鐵鹽（Fe2（SO4）3，F(xiàn)eCl3FeSO4·7H2O）鐵需在偏酸的環(huán)境中才被組織吸收，解決策略是以螯合形式出現(xiàn)3.2培養(yǎng)基的成份關(guān)于螯合鐵鹽用FeSO4·7H2O和Na2·EDTA制備，方法：Na2·EDTA：ethylenediaminetetra-acid（乙二胺四乙酸）缺元素愈傷組織的表現(xiàn)氮:不能形成導(dǎo)管,有花色素色彩氮、鉀或磷:細胞過度生長,形成層組織減退硫:非常明顯地褪綠鐵：細胞分裂停止硼：細胞分裂停滯，細胞伸長錳或鉬：影響細胞伸長3.2培養(yǎng)基的成份3.2.2有機營養(yǎng)成份（1）維生素：硫胺素（VB1),吡哆醇（

4、VB6）維生素C（VC），煙酸（PP或VB3）等（2）氨基酸：甘氨酸，水解酪蛋白（CH）等（3）肌醇（4）碳源：蔗糖，葡萄糖（5）天然復(fù)合物：椰乳（CM），香蕉，馬鈴薯，酵母提取液（YE）3.2培養(yǎng)基的成份3.2.3其它成份（1）植物生長物質(zhì)（2）活性炭（AC）：（3）凝固劑（4）其它關(guān)于植物生長物質(zhì)植物激素：又稱內(nèi)源激素，是植物體內(nèi)天然存在的代謝物質(zhì)。（細胞分裂素，生長素，赤霉素，脫落酸和乙烯）植物生長調(diào)節(jié)劑：為人工合成的有機化合物，具有促進、抑制或以其它方式改變植物某一個生理過程的功能。植物生長物質(zhì)：植物激素和植物生長調(diào)節(jié)劑的統(tǒng)稱生長延緩劑：矮壯素，多效唑(PP333)生

5、長抑制劑：脫落酸(ABA)3.2.3植物激素（植物生長調(diào)節(jié)劑）（1）細胞分裂素：6-BA（6-芐基氨基嘌呤）；KT（激動素）;ZT（玉米素）；2-ip（異戊烯基腺嘌呤）;PBA（多氯苯甲酸）;TDZ不溶于水，用1NHcl或1NNaoH助溶；作用效果：Zt>2-ip>6-BA>Kt（2）生長素：NAA（萘乙酸），IAA（吲哚乙酸），IBA（吲哚丁酸），2，4-D，GA3（赤霉素）;不溶于水，用95%灑精或1NNaoH助溶；作用效果：2，4-D>NAA>IBA>IAA3.2.3植物激素（植物生長調(diào)節(jié)劑）關(guān)于IAA（吲哚乙酸）：●IAA貯備液在幾天內(nèi)發(fā)生光解，變成粉色，須置于棕色瓶

6、中，貯存時間最好不超過一周●因高溫會破壞IAA的結(jié)構(gòu)（熱不穩(wěn)定性），IAA需采用過濾滅菌3.2.3植物激素（植物生長調(diào)節(jié)劑）關(guān)于赤霉素（GA3）：●因高溫會破壞GA3的結(jié)構(gòu)（熱不穩(wěn)定性），需采用過濾滅菌關(guān)于生長調(diào)節(jié)劑的配比細胞分裂素/生長素被稱為組織培養(yǎng)的激素配比模式；細胞分裂素/生長素>1，有利長芽；細胞分裂素/生長素<1，有利長根；細胞分裂素/生長素配比的應(yīng)用需注意其相對值，以低、中等含量為好；高濃度的細胞分裂素含量和高激素配比都可使培養(yǎng)物發(fā)生誘變；較易引起突變的激素：腺嘌呤，異戊基腺嘌呤（2-ip)，矮壯素等；3.2.4固化劑-瓊脂、卡拉膠影響培養(yǎng)基凝固效果的因素：1、

7、卡拉膠含量；2、培養(yǎng)基的PH值，偏酸不利凝固；3、高壓滅菌時間，過長影響凝固；3.2.5其它成份1.活性炭的作用：吸附功能；加入活性炭不利培養(yǎng)基凝固。2.硝酸銀：抑制乙烯活性促進莖芽分化的作用使用濃度:1-10mg/L；過濾滅菌.3.2.5其它成份3.抗生素：常用的抗生素：青霉素、鏈霉素、土霉素等，用量：5-20mg/L；過濾滅菌3.2.6PH值一般為PH5.8左右3.3培養(yǎng)基的設(shè)計及配制設(shè)計內(nèi)容：1、基本培養(yǎng)基的選擇2、激素種類和配比3、蔗糖的濃度4、其它成份的添加5、PH值的確定設(shè)計方案的選擇：3.