組培實驗指導

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1、植物細胞組織培養(yǎng)實驗指導（修訂版）園藝專業(yè)適用德州學院農(nóng)學系2010年12月實驗一植物組織培養(yǎng)實驗室參觀及消毒一、目的要求通過實驗，使學牛熟悉組織培養(yǎng)中所涉及的各種儀器和器皿用具，樹立組織培養(yǎng)的無菌意識；掌握組織培養(yǎng)實驗室器皿的洗滌與滅菌方法。二、儀器與材料用具1、儀器超凈工作臺、空調(diào)機、高床滅菌鍋、冰箱、光照培養(yǎng)箱、電磁爐、天平、烘箱籌設(shè)備以及各種培養(yǎng)器皿、各種實驗器皿和各種器械用具。2、材料用具：新潔爾滅、高鐳酸鉀、甲醛、70%酒粘、洗滌劑、噴霧器、工作服、口罩和手套等。三、方法步驟1、集屮介紹組織培養(yǎng)實驗室守

2、則及有關(guān)注意事項。然后講解木次實驗的目的、儀器設(shè)備和器皿用具。2、講解組織培養(yǎng)實驗宗的構(gòu)建情況，包括緩沖室、無菌操作室和培養(yǎng)室的設(shè)計要求以及內(nèi)部儀器設(shè)備的名稱及作用；準備室的各種儀器設(shè)備和器皿用具的名稱與用途。3、地面、墻壁和工作臺的滅菌將配好的2%新潔爾火溶液或其它消毒液倒入噴霧器屮，對地面、墻壁、如落均勻噴霧。在噴房頂時，注意不要讓藥液滴入眼睛。4、無菌室和培養(yǎng)室的滅菌首先將房子關(guān)閉，然后用10ml甲醛和高猛酸鉀的配比液進行熏蒸。操作時耍戴好口罩和手套，操作時要注意避開煙霧。5、培養(yǎng)器皿的洗滌為滅菌將培養(yǎng)器皿先

3、用肥皂水或洗衣粉浸泡兒小吋，然后用清水沖洗，最后用蒸綢水沖遍，烘T后備用。四、實驗報告1、將本次實驗內(nèi)容整理成實驗報告。2、每人設(shè)計一個植物組織培養(yǎng)實驗室的構(gòu)建方案。3、簡述組織培養(yǎng)實驗室的滅菌過程為注意事項。實驗二MS培養(yǎng)基母液的配制與保存一、目的要求通過MS培養(yǎng)基母液的配制與保存，掌握配制為保存培養(yǎng)基母液的基本技能。二、材料與用具配制MS培養(yǎng)基母液所需要的藥品、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、天平、燒杯、容量瓶、量筒、蒸懈水、95%的酒精或O.lmol/L的NaOH、O.lmol/L的HCL、試劑瓶、標簽、冰箱。三、方法步驟1、

4、母液的配制（1）母液1（大量元素）的配制稱量：用電子天平稱取下列藥品，分別放入燒杯。NII.NOs33gKNOs38gMgSO4.7H207.4gKHJO3.4g混合：用少量蒸憾水將藥品分別溶解,然后依次混合。定容：加蒸僻水定容至1000ml成20倍液。（2）母液2（鈣鹽）的配制稱量：用電子天平稱取CsCL2?2比022.Ogo定容：加蒸飾水定容至500ml成100倍液。（3）母液3（鐵鹽）的配制稱量：用電子天平稱取下列藥品，分別放入燒杯。Na2-EDTA1.865g;FeSO>?7FM1.390g混合：用少量蒸飾

5、水將藥吊分別溶解后混合。定容：加蒸飾水定容至500ml成100倍液。（4）母液4（微量元素）的配制稱量：用電子犬平稱取卜-列藥品，分別放入燒杯。H：3030.31gNaMoO；?2H200.0125gMnSOi?4比01.115gCuSO.；?5比00.00125gKT0.0415g混合：川少量熬謂水將藥品分別溶解，然后依次混介。定容:加蒸飾水定容至1000ml成50倍液。（5）母液5（有機）的配制稱量：川電子天平稱取下列藥品，分別放入燒杯。肌醇5.0gVB..0.025g甘氨酸0.lgVBi0.005g煙酸0.0

6、25g混合：用少量蒸錨水將藥品分別溶解后混合。定容：加蒸佛水定容至250ml成200倍液。（7）植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制稱量：川電子天平稱取生長索或細胞分裂索50-100mgo溶解：生長素用少量95%的酒精或0.lmol/L的NaOH溶解,細胞分裂素用0.lmol/L的HCL加熱溶解。定容：加蒸餡水定容至100ml配制成0.5-lmg/mL的溶液。2、母液的保存（1）裝瓶：將配制好的母液分別倒入試劑瓶中，貼好標簽，注明培養(yǎng)基名稱、母液倍數(shù)與配制口期。（2）儲藏：將母液放在4°C冰箱中備用。四、實驗報告將木次實驗內(nèi)

7、容整理成實驗報告，并敘述實驗過程屮的注意事項。實驗三MS固體培養(yǎng)基的制備與滅一、目的要求通過MS固體培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的基本技能及高壓滅菌技術(shù).二、材料用具MS培養(yǎng)皐的各種母液、生長調(diào)節(jié)劑母液、瓊脂、蔗糖、蒸餡水移液管、容量瓶、電磁爐、PII試紙、0.lmol/1的氫氧化鈉、0.lmol/1的鹽酸、培養(yǎng)瓶、標簽、鉛筆、高壓滅菌鍋。三、方法步驟1、按母液順序和規(guī)定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸懈水的量筒。母液一50ml母液二10ml母液三10ml母液四20ml母液五5ml2、加入生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：加入量與

8、視不同培養(yǎng)物的不同而不同，有時也可不加。3、加入瓊脂7g/lo4、加蒸鎘水定容至lOOOmlo5、在電磁爐上煮沸，不斷攪拌，使瓊脂熔化。6、調(diào)PH值至5.8-6.2之間7、分注：把培養(yǎng)棊分注到培養(yǎng)瓶中，每瓶20-35nil。蓋好蓋，貼上標簽，注明培養(yǎng)基的種類、時間等。8、把裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶放到高壓滅菌鍋里滅菌20分鐘，滅菌壓力為108Kpa,溫圜121°C