番茄紅素調(diào)節(jié)免疫作用及機(jī)制探究

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1、番茄紅素調(diào)節(jié)免疫作用及機(jī)制探究摘要：［目的］探討番茄紅素對(duì)免疫系統(tǒng)的作用及機(jī)制。［方法］經(jīng)口給小鼠每ks體重1.67mg,3.33rug>10mg番茄紅素，觀察番茄紅紊對(duì)小鼠免疫功能及抗氧化能力的影響。［結(jié)果］番茄紅素對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)有促進(jìn)作用，ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)，溶血空斑數(shù)、血清溶血素也顯著高于對(duì)照組，巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞吞噬率、吞噬指數(shù)明顯高于對(duì)照組。10mg/kg番茄紅素組血清超氧化物歧化酶(SOD)活力為133.8U/ml,谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-h)活力為158,9U/ml,丙二醛(MDA)含量為4.Inmol/mg,與對(duì)照組差異有顯

2、著性。［結(jié)論］番茄紅素能夠增強(qiáng)小鼠單核巨噬細(xì)胞作用及體液免疫和細(xì)胞免疫功能，這與其提高抗氧化能力有關(guān)。關(guān)鍵詞：番茄紅素；免疫；超氧化物歧化酶；丙二醛；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶中圖分類(lèi)號(hào)：R151.4+3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼番茄紅素是最主要的類(lèi)胡蘿卜素之一，無(wú)維生素A原活性，人體主要從番茄及其制品中獲取。番茄紅素是一種抗氧化劑，具有預(yù)防和緩解某些腫瘤及心血管疾病的作用。目前各國(guó)尚未建立番茄紅素的膳食參考攝入量，因其未被任何衛(wèi)生組織承認(rèn)是一種營(yíng)養(yǎng)素。番茄紅素許多生物學(xué)功能還不十分清楚，本研究就番茄紅素對(duì)免疫系統(tǒng)的作用及其可能的作用機(jī)制進(jìn)行探討。1材料與方法1.1材料1.1.1番茄紅素上海某生

3、物工程公司提供，純度，99%。1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)ICR小白鼠，雄性，體重18?22g,由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將其分成4組,每組40只。1.2方法1.2.1劑量選擇番茄紅素設(shè)3個(gè)劑量組、1個(gè)溶劑對(duì)照組。番茄紅素劑量分別為1.67mg/kg^3.33mg/kg^10mg/kgo各組經(jīng)口灌胃1次/d,連續(xù)喂飼30d后進(jìn)行免疫指標(biāo)和抗氧化能力測(cè)定。1.2.2遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)測(cè)定小鼠腹部去毛，用1%DNFB溶液50h1致敏小鼠。5d后用1%DN—FB溶液10^1于小鼠右耳進(jìn)行攻擊。24h后頸稚脫臼處死小鼠，用打孔器取下直徑8mm的左右耳片，稱(chēng)重并計(jì)算腫脹度

4、。1.2.3小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化測(cè)定將小鼠脾臟制成2x10°個(gè)/ml細(xì)胞懸液，分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，一孔加5041ConA液，另一孔作對(duì)照，在5%C02和37°C環(huán)境下培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h,每孔吸去上清液0,7ml,加人0.7mlPRM11640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTr50nd/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h,每孔加入lml酸性異丙醇，使紫色結(jié)晶完全溶解后，在570nm處測(cè)定吸光度。1.2.4血清溶血素測(cè)定用脫纖維SRBC免疫5d后，從內(nèi)眥靜脈采血，分離血清。在微量血凝板上加25：A1血清，以生理鹽水倍比稀釋?zhuān)尤氲攘?.5%SR-BC懸液，裝入濕潤(rùn)的平盤(pán)，37T保溫3h,當(dāng)血球

5、對(duì)照出現(xiàn)沉落時(shí)觀察結(jié)果。1.2.5抗體生成檢測(cè)SRBC免疫5d后，將脾臟制成5x10°個(gè)/ml細(xì)胞懸液。表層培養(yǎng)基加熱溶解后，與等量pH7.2的Hanks液混合，分裝小試管，再向管內(nèi)加入50ull0%SRBC,20ul脾細(xì)胞懸液，涂于已刷瓊脂薄層的平皿上，在C02培養(yǎng)箱溫育1.5h,然后用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體（1：10）加入到平皿中，繼續(xù)溫育1.5h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。1.2.6小鼠碳廓清測(cè)定動(dòng)物連續(xù)給樣30d后，于尾靜脈注射1：3稀釋的印度墨汁，立即計(jì)時(shí)。分別于注入墨汁后2min、lOmin,從眼內(nèi)眥靜脈采血20U1,加到2mlNa2C03溶液中，在600nm波長(zhǎng)處測(cè)0

6、D值，以Na2C03溶液作空白對(duì)照。根據(jù)動(dòng)物體重、肝重和脾重計(jì)算廓清指數(shù)。1.2.7巨噬細(xì)胞吞噬能力每鼠腹腔注射20%雞紅細(xì)胞懸液lml,30min后，將小鼠頸椎脫臼處死，固定于鼠板上，注射生理鹽水2nd,吸出腹腔洗液1ml,分滴于2片玻片，于37￡孵箱濕孵30min,以1：1丙酮甲醇溶液固定，4%Giemsa—磷酸緩沖液染色3min,漂洗晾干鏡檢，計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。1.2.8抗氧化酶及脂質(zhì)過(guò)氧化物測(cè)定血清超氧化物歧化酶(SOD)活力：黃嚓吟氧化酶法。血清丙二醛(MDA)含量:硫代巴比妥酸法。血清谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力(GSH-Px):DTNB比色法。這3種方法均

7、采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒。1.2.9統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。2結(jié)果2.1番茄紅素對(duì)小鼠細(xì)胞免疫的影響表1顯示，10mg/kg番茄紅素組經(jīng)DNFB刺激后DTH增加值為22.8mg,與對(duì)照組比較戶P