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《山東花生腐霉根腐病病原鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、山東花生腐霉根腐病病原鑒定摘要：利用組織分離技術(shù)和選擇性培養(yǎng)基純化技術(shù)對(duì)山東地區(qū)花生腐霉根腐病的病原菌進(jìn)行了分離和純化。按照柯赫法則，根據(jù)余永年真菌形態(tài)學(xué)鑒定方法及利用ITS序列比對(duì)等分子生物學(xué)方法對(duì)病原菌進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明，引起山東地區(qū)花生腐霉根腐病的病原菌為群結(jié)腐霉（PythiummyriotylumDrcchslcr）、旋柄腐霉（Py〃血加Drcchslcr）、畸雌腐霉（Py/加“加irrgMd"Buisman）以及終極腐霉CPythiumultimumTrow）。關(guān)鍵詞：花牛；腐霉；根腐?。昏b定IdentificationofPeanutPythiumRootRotPathogen
2、inShandongAbstract：PathogenofpeanutPythiumrootrotpathogeninShandongwasisolatedandpurifiedbytechniquesoftissueisolationandselectivemedia.BasedonKochesrule,thepathogenwasidentified.bythemethodsofFungalmorphologicalandITSsequencealignment.AnditindicatedthatthepathogenofpeanutPythiumrootrotpathogeninSh
3、andongwasPythiummyriotylumDrechsler>PythiumhelicoidesDrcchslcr>PythiumirregulareBuismanandPythiumultimumTrow.Keywords:peanut;Pythium;rootrot;identification近年來，隨著種植花生經(jīng)濟(jì)效益的不斷提高，山東省的花生種植面積也在不斷增長(zhǎng)，目前主要?jiǎng)澐值膬纱髢?yōu)勢(shì)區(qū)域，一是以種植春花生為主的膠東半島、魯中和魯東南地區(qū)的29個(gè)縣；二是以種植夏花生為主的魯西和魯西南地區(qū)黃河故道的5個(gè)縣。其小花生腐霉根腐病是影響山東花生產(chǎn)量的主要因素Z-,由于種植而積大，產(chǎn)
4、區(qū)集中，連作面積廣，給花生生產(chǎn)造成了很大危害。花生根部病害調(diào)查分離時(shí)，我們從以上大部分地區(qū)的花生病株中分離到了腐霉菌（PW加Msp）,為了明確山東省花生腐霉根腐病的病原特征及生物學(xué)特性，為防治提供依據(jù)，作者于2007-2009年度對(duì)山東花生腐霉根腐病病原進(jìn)行了研究，結(jié)果報(bào)道如下。1材料與方法1.1癥狀表現(xiàn)調(diào)查方法對(duì)山東地區(qū)不同花生產(chǎn)區(qū)的花生進(jìn)行出間病害調(diào)查并采集發(fā)病樣本，記錄花生從播種到收獲是否能受到腐霉的侵染而發(fā)病，被害植株是否萎驚，須根的腐爛情況以及初生根、次生根和主根的尖端是否特別容易受害，根系是否完全被破壞[1]O1.2病原菌分離與純化方法將從田間采集的病株須根系用H來水沖洗干凈，用
5、吸水紙吸干表而的水珠，將病株須根系剪成長(zhǎng)5mm的小塊，將其放置于VP?選擇性培養(yǎng)基中〔2]25°C培養(yǎng)。24h后不斷觀察，發(fā)現(xiàn)有腐霉長(zhǎng)出立即轉(zhuǎn)移到CMA培養(yǎng)基上放在25°C恒溫箱中培養(yǎng)，純化，轉(zhuǎn)入CMA斜面培養(yǎng)，5d后菌絲長(zhǎng)滿，放入4°C冰箱保存?zhèn)溆谩?.3病原菌致病性測(cè)定方法按照柯赫法則⑶，采用盆栽接種測(cè)定方法測(cè)定病原菌的致病性，將土壤滅菌后裝屁盆，種屁生（屁育22）,花生團(tuán)棵后，把4°C保存的菌種在CMA培養(yǎng)基上25°C擴(kuò)繁，長(zhǎng)滿菌絲后按4%（菌:±）的接種量，與花盆內(nèi)的土壤混勻，保濕筒保濕48h后調(diào)查發(fā)病情況，調(diào)查持續(xù)一周，從病組織分離回接菌種，并作單菌絲培養(yǎng)。1.4病原菌種類鑒定方法
6、1.4.1病原菌最適溫度及pH值測(cè)定將PDA培養(yǎng)基制成平板。將事先培養(yǎng)好的直徑5mm的病菌圓餅轉(zhuǎn)接在平板中央，分別置于4°C、10°C、15°C、20°C、25°C、30°C和35°C進(jìn)行病原菌最適生長(zhǎng)溫度測(cè)定。在將PDA培養(yǎng)基的pH值調(diào)至3-12,按照上述方法將接好菌餅的培養(yǎng)皿置于25°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，定期觀察，記錄菌落生長(zhǎng)速率以及菌落形態(tài)特征。1.4.2病原菌形態(tài)觀察將腐霉菌在CMA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，3d后移取邊緣菌絲至皮氏（Petri）培養(yǎng)液中，25°C培養(yǎng)1?3d挑取砲子囊，觀察抱子囊形態(tài)，有無層出現(xiàn)象，游動(dòng)抱子的游出方式,并且測(cè)量砲子囊大小。待出現(xiàn)藏卵器、雄器、卵抱子后,觀察藏
7、卵器、雄器的形態(tài)，著生位置，配合情況及卵砲子的形態(tài)特征，每項(xiàng)指標(biāo)分別觀察測(cè)量100個(gè)，并且測(cè)量其大小，計(jì)算平均值⑷。鑒定則依據(jù)抱子囊、藏卵器、雄器、卵孑包子的形態(tài)特征，大小及其特性來鑒定，主要參考《中國(guó)真菌志》（第六卷，科學(xué)出版社，余永年主編）進(jìn)行鑒定⑴。1.4.3病原菌ITS序列測(cè)定將事先用CMA平板培養(yǎng)好的病原菌的菌落刮取下來，利用Biospin植物基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取，而后利用通用引物(
