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《蔣玉祥本科畢業(yè)論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)密級(jí)五號(hào))UDC本科畢業(yè)論文七鯉'鰻(Petromyzonmarinus)類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3的基因結(jié)構(gòu)和功能研究學(xué)生姓名蔣玉祥學(xué)號(hào)040012006029指導(dǎo)教師周建峰教授院'系、中心海洋生命學(xué)院專業(yè)年級(jí)06生物化學(xué)與分子生物學(xué)論文答辯日期年月日中國(guó)海洋大學(xué)七鯉鰻｛Petromyzonmarinus｝類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3的基因結(jié)構(gòu)和功能研究完成日期：指導(dǎo)教師簽字：答辯小組成員簽字：七鯉鰻^Petromyzonmarinus)類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3的基因結(jié)構(gòu)和功能研究摘要IGF結(jié)合蛋白(IGFBP)-3是一種細(xì)胞外分泌蛋白，它
2、能結(jié)合并調(diào)控IGF信號(hào)。IGFBP-3在培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中還會(huì)表現(xiàn)出配體非依賴的功能。除了IGF結(jié)合域(IBD),哺乳動(dòng)物IGFBP?3還有一個(gè)核定位信號(hào)(NLS)和轉(zhuǎn)錄激活域(TA)。但是,IGFBP-3的這些結(jié)構(gòu)域的體內(nèi)功能尚不明確。本研究顯示在無(wú)頜類七鮑鰻I(yíng)GFBP-3中這些結(jié)構(gòu)域在進(jìn)化上也是保守的，其中IGFBP-3ORF1含IGF結(jié)合結(jié)構(gòu)域、核定位信號(hào)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)或分別可以與IGF結(jié)合、能定位于細(xì)胞核，有轉(zhuǎn)錄激活活性。通過(guò)構(gòu)建數(shù)個(gè)IGFBP-3ORF1突變體來(lái)研究其功能，顯微注射IGFBP-3ORF1和突變體的mRNA可使斑馬魚(yú)的胚胎
3、背部化，發(fā)現(xiàn)這種背部化作用是IGF非依賴性的，并且不依賴于核定位信號(hào)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域。關(guān)鍵詞：七鯉鰻I(yíng)GFIGFBP-3突變體GenestructureandfunctionstudyoflGFBP3insealamprey(Petromyzonmarinus)AbstractIGFbindingprotein(IGFBP)-3isasecretedproteinthatbindsandmodulatesIGFactionsinextracellularenvironments.IGFBP?3alsohasligand-independentact
4、ionsinculturedmammaliancells.InadditiontoitsIGFbindingdomain(IBD),mammalianIGFBP-3hasafunctionalnuclearlocalizationsignal(NLS)andti*ansactivationdomain(TA).ThespecificrolesofthesestructuraldomainsofIGFBP-3inmediatingitsinvivoactionsareunclear.Thestudyshowsinsealampreythedomain
5、sofIGFBP3areevolutionarilyconserved.Tostudythefunctionalrolesofthesedomains,severalIGFBP-3ORF1mutantswereengineered.TheIBDmutantfailedtobindIGF-Ibuthadnormalnuclearlocalization.TheNLSmutanthadgreatlyreducednuclearlocalizationbutshowednormalIGFbinding.TheIBD+NLSdoublemutanthadi
6、mpairedIGFbindingandnuclearlocalization.Whenexpressedinzebrafishembryos,wild-typeIGFBP-3,NLS,andTAmutantshadstrongdorsalizingeffects.TheactivitiesoftheIBDmutantandtheIBD+NLSmutantweresignificantlylower,suggestingthatIGFBP-3actsinIGF?dependentand-independentmannersandthattheIGF
7、-independentactionisnotrelatedtoitsnuclearlocalizationortransactivationactivity.Keywords:sealampreyIGFIGFBP3mutant目錄1文齪就1IGF信號(hào)通路系統(tǒng)11.1.1TGF信號(hào)爾系統(tǒng)雌11.1.2IGFBP-3概述21.2七鮑鰻與基因倍增41.2.1七鯉鰻腿41.2.2基因倍增41.3本研究的目的和意義62材料和方法82.1化學(xué)卿82.2實(shí)驗(yàn)儀器82.3實(shí)驗(yàn)材料92.4Blast分析和序列上閔92.5IGFBP-3的系魏化分析92.6突變體質(zhì)粒
8、構(gòu)建92.7細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染102.BWestern免疫E卩跡112.9酉己體E卩i変112.10統(tǒng)計(jì)分析133實(shí)驗(yàn)結(jié)果14
